宁波大学张冬雨获国家专利权
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龙图腾网获悉宁波大学申请的专利一种孔板式低场核磁共振/比色法双模式检测食源性致病菌的方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN116593686B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-09-09发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202310413737.5,技术领域涉及:G01N33/531;该发明授权一种孔板式低场核磁共振/比色法双模式检测食源性致病菌的方法是由张冬雨;郭智勇;陈乐;郝婷婷;邬杨波;谢建军设计研发完成,并于2023-04-18向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种孔板式低场核磁共振/比色法双模式检测食源性致病菌的方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种孔板式低场核磁共振比色法双模式检测食源性致病菌的方法,特点是包括以下步骤1信号单元MNS@Ab2的合成;2在96孔板壁上形成MNS@Ab2‑VP‑Ab1复合结构,每孔加入硫酸,再加入高锰酸钾溶液,酶标仪测定吸光度进行比色分析;3将96孔板拆卸成单独的小杯放入核磁测试管,使用IR脉冲序列测量法进行T1测量,ΔT1的值由以下公式计算:ΔT1=T1negative–T1positive,根据电流信号值计算获得待测溶液中食源性致病菌浓度;优点是灵敏度高、特异性强、精确性好且操作简单快速的。
本发明授权一种孔板式低场核磁共振/比色法双模式检测食源性致病菌的方法在权利要求书中公布了:1.一种孔板式低场核磁共振比色法双模式检测食源性致病菌的方法,本方法不以诊断或治疗为目的,其特征在于包括以下步骤: (1)信号单元MNS@Ab2的合成 将25mg1-乙基-3-二甲基氨基丙基碳二亚胺盐酸盐EDC、10mgN-羟基琥珀酰亚胺NHS溶解在10mL0.5mgmL二维磁性纳米片MNS分散液中,用0.01molL盐酸调节pH=5.0,室温下搅拌30min,加入100μL0.5mgmL食源性致病菌多克隆抗体Ab2,室温下偶联反应3h后,加入200μL2wt%牛血清白蛋白BSA溶液以封闭非特异性结合位点,磁力清洗后,所得沉淀物分散在10mLpH=7.4,0.1molL的PBS溶液中,即得到信号单元MNS@Ab2分散液,其中所述的二维磁性纳米片的制备方法步骤如下:将540mgFeCl3·6H2O、200mg柠檬酸三钠、7mL乙二醇和13mL二乙二醇混合,室温搅拌30min溶解;然后加入2g乙酸钠与25mg单层氧化石墨烯GO粉末,室温搅拌30min,将混合物转移至聚四氟乙烯反应釜内,在200℃下反应8h,将获得的黑色沉淀用水和乙醇清洗,并置于真空干燥箱内60℃烘干,得到表面组装有Fe3O4纳米颗粒的氧化石墨烯GO,即二维磁性纳米片; (2)比色法检测 取洁净的96孔板,每孔加入100μL2.0μgmL食源性致病菌多克隆抗体Ab1,4℃孵育10h后,用0.1molLPBS清洗三次以除去游离的Ab1;室温下,采用250μL2wt%BSA封闭非特异性结合位点,最后用水清洗除去多余的BSA;每孔加入200μL待测样品,室温孵育30min,倒去剩余液体加入200μL0.5mgmL信号单元MNS@Ab2分散液;孵育30min后清洗三次除去未反应的MNS@Ab2;经过免疫反应,在96孔板壁上形成MNS@Ab2-VP-Ab1复合结构,每孔加入100μL3molL硫酸溶解Fe3O4纳米粒子,再加入100μL0.25mmolL高锰酸钾溶液,酶标仪测定吸光度进行比色分析,根据吸光度值与食源性致病菌浓度之间的定量关系即可测定未知样品中食源性致病菌浓度; (3)低场核磁共振均相免疫检测 将96孔板拆卸成单独的小杯放入核磁测试管,在35℃下,使用IR脉冲序列测量法进行纵向驰豫时间T1测量,根据水质子的纵向驰豫时间差值与食源性致病菌浓度之间的定量关系即可测定未知样品中食源性致病菌浓度,ΔT1的值由以下公式计算:ΔT1=T1negative–T1positive,其中,T1negative是无食源性致病菌时的平均T1,T1positive是有食源性致病菌时的平均T1。
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