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龙图腾网获悉中国科学院大学宁波华美医院申请的专利肿瘤细胞特有修饰多肽/蛋白的制备方法、抗体及肿瘤诊疗方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN115508489B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-09-09发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202211320874.6，技术领域涉及：G01N30/08；该发明授权肿瘤细胞特有修饰多肽/蛋白的制备方法、抗体及肿瘤诊疗方法是由郭维英设计研发完成，并于2022-10-26向国家知识产权局提交的专利申请。

本肿瘤细胞特有修饰多肽/蛋白的制备方法、抗体及肿瘤诊疗方法在说明书摘要公布了：本申请公开了一种肿瘤细胞特有修饰多肽蛋白的制备方法、抗体及肿瘤诊疗方法，通过从肿瘤组织细胞中制备得到细胞膜蛋白，质谱明确修饰位点，修饰分子结构，鉴定被修饰的多肽蛋白质。通过对发生新修饰的目的蛋白或者多肽进行制备，并利用该目的蛋白或者多肽制备诊断肿瘤的抗体以及用于制备治疗肿瘤的抗体。进行查库时，根据多肽蛋白的氨基酸位点、连接的分子位点、修饰基团不同，查出被修饰的多肽及蛋白质，利用该修饰后蛋白功能可以解释肿瘤的生物学行为。有了被修饰的多肽及蛋白质的清晰结构，就可以制备抗体。制备抗体后可以用于肿瘤诊断，人源化的抗体可因为抗原抗体反应消灭肿瘤细胞，也可携带细胞毒药物，定向杀灭肿瘤。

本发明授权肿瘤细胞特有修饰多肽/蛋白的制备方法、抗体及肿瘤诊疗方法在权利要求书中公布了：1.一种肿瘤细胞特有修饰多肽或蛋白的制备方法，其特征在于，包括如下步骤： 从肿瘤组织中提取得到细胞膜蛋白质； 采用蛋白质酶解法，对所述细胞膜蛋白质进行酶解，获取目的多肽，包括： 将二硫苏糖醇DTT液加入上述蛋白质溶液样品试管中，得到DTT最终浓度为100mM的溶液，将试管置于沸水浴反应5min，然后放置于试管架逐渐冷却至室温； 在上述溶液加入200μLUAbuffer液混匀，转入到10kD超滤离心管中，高速离心，弃滤液，重复该步骤，取上清液； 加入100μL50mmollIAAbuffer，600rpm振荡1min，室温下避光反应30min，高速离心，再次加入100μLUAbuffer离心，重复该步骤两次； 加入100μL25mMNH4HCO3溶液，离心，重复该步骤两次； 加入40μLTrypsinbuffer，600rpm振荡1min，37℃静置16-18h； 更换新收集管，离心；加入40μL25mMNH4HCO3，离心14000*g15min，收集滤液；其中，所述滤液中包含目的多肽； 对所述目的多肽采用强阴离子交换层析方法进行富集，得到富集后的目的多肽，包括：配制洗脱缓冲液A、洗脱缓冲液B、20%乙醇及1MNaOH，其中：洗脱缓冲液A为0.05MTris-HCl，pH=8.5；洗脱缓冲液B为0.5MNaCl，0.05MTris-HCl，pH=8.5；分别对洗脱缓冲液、20%乙醇、1MNaOH及去离子水用0.45μm滤膜进行抽滤以除去少量杂质；将上述抽滤除杂的溶液置于4℃备用；清洗AKTA蛋白快速纯化系统，连接AKTA、CaptoHiResQ550预装柱、紫外检测器和收集装置，并检查气密性；将冷柜温度调至4℃，先后接入去离子水和洗脱缓冲液，分别平衡至检测器曲线不再变化，调节流速0.2mLmin；将上述酶解后收集到的滤液用洗脱缓冲液充分溶解，用0.45μm的一次性注射用滤器过滤去除不溶物，接入AKTA蛋白快速纯化系统进行上样；上样完毕后接入洗脱缓冲液A，洗出未被吸附的蛋白，待流穿峰完全洗出后，用洗脱缓冲液A和洗脱缓冲液B进行梯度洗脱，并分别收集各个洗脱峰；收集多肽峰从3mAU起始收集，并于-80度冷冻保存；酶解后产生多肽在PH8.5左右的溶液中，其多肽上的N端氨基和肽中任何组氨酸都不是质子化，而是以中性形式存在，而肽中Asp，Glu和酪氨酸残基均为阴离子，赖氨酸被部分质子化，精氨酸被完全质子化，在这个PH，富含Asp，Glu和酪氨酸残基的多肽容易通过离子交换保留；所以选择膜蛋白酶解后进行强阴离子交换层析，能够富集含-COOH的多肽；目的多肽的氨基酸侧链修饰，末端含有-COOH，在PH8.5的溶液中为阴离子； 对富集后的目的多肽进行质谱分析、鉴定，明确有无目的修饰基团； 根据修饰类型及修饰位点，并经过PD查库，明确该修饰基因的序列，得到所述肿瘤细胞特有修饰多肽或蛋白：可变修饰OxidationM，AcetylProteinN-term：修饰的分子量72，氨基酸为丝氨酸及苏氨酸侧链羟基上连C3H5O2；一级离子质量容差：±20ppm；二级离子质量容差：0.1Da。

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