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龙图腾网获悉上海欧易生物医学科技有限公司申请的专利一种适用于全转录测序的人硬骨组织细胞的获得方法及应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN118166067B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-09-12发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202311780745.X，技术领域涉及：C12Q1/6806；该发明授权一种适用于全转录测序的人硬骨组织细胞的获得方法及应用是由范黎明;王佳琦;朱燕敏;石今朝;殷昊;肖云平设计研发完成，并于2023-12-22向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种适用于全转录测序的人硬骨组织细胞的获得方法及应用在说明书摘要公布了：本发明公开了一种适用于全转录测序的人硬骨组织细胞的获得方法，包括如下步骤：组织清洗和预处理：将人硬骨组织置于离心管中，用DPBS浸泡，颠倒离心管清洗人硬骨组织，并用预冷的BL缓冲液孵育进行预处理；组织处理和酶解：将孵育后的人硬骨组织和BL缓冲液通过细胞筛网，用预冷的PBS冲洗组织2～3次；将细胞筛网上的人硬骨组织转移到培养皿中并加入BE溶液，剪小组织，补加BE溶液；将培养皿放入37℃恒温培养箱，酶解15min，每5min摇晃培养皿；酶解结束后，使用移液器将酶解液转移到新的离心管中；细胞分离和收集：使用细胞筛过滤酶解液，用含0.1％mvBSA的预冷DPBS冲洗细胞筛网；将滤液置于水平离心机中离心，收集细胞。

本发明授权一种适用于全转录测序的人硬骨组织细胞的获得方法及应用在权利要求书中公布了：1.一种适用于全转录测序的人硬骨组织细胞的获得方法，其特征在于，使用BL缓冲液、BE溶液和人硬骨细胞保护剂制备人硬骨组织的细胞悬液；包括如下步骤： 步骤I、组织清洗和预处理：将人硬骨组织置于离心管中，用DPBS浸泡，颠倒离心管清洗人硬骨组织，并用预冷的BL缓冲液进行预处理；使用所述BL缓冲液进行硬骨脱无机处理，将人硬骨组织加入BL缓冲液进行所述脱无机处理，去除硬骨中的硬基质，将细胞外基质暴露至缓冲液中；所述脱无机处理的温度为4℃～6℃，处理时间为10min～15min，期间每隔2-3min进行30s水平摇晃； 步骤II、组织处理和酶解：将所述预处理后的人硬骨组织和BL缓冲液通过100μm细胞筛网，用预冷的PBS冲洗组织2～3次；将所述细胞筛网上的人硬骨组织转移到培养皿中并加入BE溶液，剪小组织，补加BE溶液；将培养皿放入37℃恒温培养箱，酶解15min，每5min摇晃培养皿；酶解结束后，使用移液器将酶解液转移到新的离心管中； 步骤III、细胞分离和收集：使用40μm细胞筛过滤酶解液，用含0.1％mvBSA的预冷DPBS冲洗细胞筛网；将滤液置于水平离心机中离心，收集细胞； 步骤Ⅳ：人硬骨组织细胞保护处理： 步骤a、向人硬骨组织细胞悬液离心得到的细胞沉淀中加入人硬骨细胞保护剂，重悬细胞沉淀，并混匀悬液； 步骤b：将步骤a中的保存细胞用的离心管放置于4～6℃环境中，静置8～10min； 步骤c：向离心管中加入预冷的DPBS，上下颠倒混匀4～5次，置于水平离心机中离心富集细胞； 所述BE溶液的成分为：使用1×HBSS溶解的0.2％～0.25％mv胶原酶I和0.2％～0.25％mv木瓜蛋白酶； 所述BL缓冲液的成分为：0.005～0.01M盐酸，0.1％～0.2％vv吐温20，0.1％～0.2％mv谷胱甘肽，0.01M～0.02M三2-羧乙基膦，使用去离子水配置，pH＝5.5～6； 所述人硬骨细胞保护剂的成分为：2～3％vv多聚甲醛PFA、0.05～0.1％mv果胶、ddH2O。

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