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龙图腾网获悉华南理工大学申请的专利一种长片段双链环状核酸的扩增和基因检测方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN118957029B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-09-16发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202410841470.4，技术领域涉及：C12Q1/6844；该发明授权一种长片段双链环状核酸的扩增和基因检测方法是由张宏陆;张欢;柴家辉;叶静怡设计研发完成，并于2024-06-27向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种长片段双链环状核酸的扩增和基因检测方法在说明书摘要公布了：本发明公开了一种双链环状核酸扩增方法，包括：将CRISPRRNP复合物与双链环状核酸混合孵育，所述双链环状核酸包括第一链和第二链，所述sgRNA可与所述第一链的靶位点特异性结合，所述Cas9切口酶可切割所述第二链；加入核酸外切酶消化所述第二链，得到缺口链；使CRISPRRNP复合物脱离所述第一链；以所述缺口链为引物，所述第一链为模板，使用聚合酶从所述引物延伸与所述模板互补的核酸，本发明中的双链环状核酸扩增方法特异性强、操作简单，可得到长度较长的单链滚环扩增产物，具有广泛应用前景。

本发明授权一种长片段双链环状核酸的扩增和基因检测方法在权利要求书中公布了：1.一种双链环状核酸扩增方法，包括： 将Cas9切口酶与sgRNA混合进行反应，所述Cas9切口酶为Cas9H840A； 加入双链环状核酸进行反应，所述双链环状核酸包括第一链和第二链，所述sgRNA可与所述第一链的靶位点特异性结合，所述Cas9切口酶可切割所述第二链； 加入核酸外切酶Ⅰ进行反应； 加入蛋白酶K进行反应； 加入dNTP、Klenow大片段酶进行扩增反应； Cas9切口酶的终浓度为25-75nM； sgRNA的终浓度为25-75nM； 双链环状核酸的终浓度为2.5-7.5nM； 核酸外切酶Ⅰ的终浓度为0.5-1.5UμL； 蛋白酶K的终浓度为1-3mgmL； dNTP的终浓度为0.5-1.5mM； Klenow大片段酶的终浓度为0.125-0.375UμL； 将Cas9切口酶与sgRNA混合进行反应是指30-37℃下孵育15-25min； 加入双链环状核酸进行反应是指30-37℃下孵育25-35min； 加入核酸外切酶Ⅰ进行反应是指30-37℃下孵育15-25min； 加入蛋白酶K进行反应是指48-55℃下孵育40-80min； 加入dNTP、Klenow大片段酶进行扩增反应是指30-37℃下扩增12-48h。

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