重庆医科大学袁拥华获国家专利权
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龙图腾网获悉重庆医科大学申请的专利用于乳腺癌HER2检测的电致化学发光适体传感器及检测方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN116593692B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-09-16发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202310571606.X,技术领域涉及:G01N33/543;该发明授权用于乳腺癌HER2检测的电致化学发光适体传感器及检测方法是由袁拥华;钟慧;白丽娟设计研发完成,并于2023-05-21向国家知识产权局提交的专利申请。
本用于乳腺癌HER2检测的电致化学发光适体传感器及检测方法在说明书摘要公布了:本发明提供一种用于乳腺癌HER2检测的电致化学发光适体传感器。本发明以发光材料3,4,9,10‑苝四羧酸(PTCA)修饰的镍基金属有机框架(Ni‑MOF)复合纳米材料(PTCA@Ni‑MOF)作为电致化学发光传感器的信号材料,对HER2的灵敏检测,为乳腺癌患者早期诊断提供新的诊断途径。本发明检测方法步骤清晰简便,灵敏度高,信号响应迅速。
本发明授权用于乳腺癌HER2检测的电致化学发光适体传感器及检测方法在权利要求书中公布了:1.一种用于乳腺癌HER2检测的电致化学发光适体传感器,其特征在于,所述用于乳腺癌HER2检测的电致化学发光适体传感器的构建方法包括如下步骤: (1)基底材料的制备; 将电极浸入1%(ww)HAuCl4·4H2O溶液中,并在-0.2V的恒定电压下电化学沉积30s,从而得到沉积的金纳米膜; (2)信号探针的制备; 1)Ni-MOF: 将166mg对苯二羧酸和96mg六水合硝酸镍搅拌分散在20mLN,N-二甲基甲酰胺中,然后在搅拌的状态下,滴加2mL浓度为0.4M的NaOH溶液,最后将得到的混合溶液转移到50ml内衬聚四氟乙烯的反应釜中,在100℃下反应8小时,反应完后冷却至室温,用大量DMF和乙醇多次洗涤,将得到的沉淀物在60℃下干燥12h,得到淡绿色的Ni-MOF纳米片; 2)PTCA: 取100mg苝四羧酸二氢酐溶于10mL含0.1M浓度的NaOH溶液中,在80℃的条件下搅拌2h,得到黄绿色的溶液,然后,向溶液中滴加浓度为1.0M的HCl至完全沉淀;然后将上述混合物离心,用超纯水洗涤至pH为7.4,在60℃下干燥,得到暗红色的粉末; 3)PTCA@Ni-MOF: 将1.5mg的Ni-MOF分散在1.5mL超纯水中,超声分散均匀,向其中加入450μL浓度为1mgmL的PTCA分散液,在室温下搅拌12h后,离心,用超纯水洗涤3次,将沉淀物分散在1mL超纯水中,即得到PTCA@Ni-MOF分散液; 4)信号探针: 将200μLpDNA缓慢加入至PTCA@Ni-MOF分散液中,在冰浴中搅拌12h,洗涤产物并离心,得到信号探针,然后,将合成的信号探针在10000rpm下离心,最终沉淀物重新分散在500μL超纯水中,在4℃储存备用; (3)构建用于HER2检测的电致化学发光适体传感器: 1)用20mMpH=7.4的Tris-HCl缓冲液室温下浸泡处理HER2结合适体链APT、APT的部分互补链cDNA,4℃储存备用; 2)将玻碳电极用食人鱼洗液浸泡30min后用超纯水冲洗干净备用; 3)将步骤2)得到的电极分别用0.3μm和0.05μm的Al2O3粉末抛光呈镜面,然后分别按超纯水、无水乙醇、超纯水的顺序超声处理电极,干燥备用; 4)将步骤3)得到的电极在0.5MH2SO4中进行电化学活化,然后用超纯水冲洗,干燥; 5)将步骤4)得到的电极浸入1%(ww)HAuCl4·4H2O溶液中,并在-0.2V的恒定电压下电化学沉积30s,从而得到沉积的金纳米膜; 6)将10μL步骤1)制得的cDNA,滴加在步骤5)制备得到的电极4℃孵育12h; 7)将10μL1%(ww)BSA溶液滴加到步骤6)得到的电极上室温孵育60min; 8)将10μL步骤1)制得的APT,滴加在步骤7)制备得到的电极上室温孵育2h; 9)将10μL目标物HER2滴加到步骤8)制备得到的电极上室温孵育50min; 10)将10μL信号探针滴加到步骤9)制备得到的电极上室温孵育2h,即得到用于HER2检测的电致化学发光适体传感器; APT、cDNA和pDNA具体序列如下: APT:5'-TCTAAAAGGATTCTTCCCAAGGGGATCCAATTCAAACAGC-3' cDNA:5'-GGAAGAATCCTTTTAGATTTTT-CH26-SH-3' pDNA:5'-TCTAAAAGGATTCTTCCTTTTT-CH26-NH-3'。
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