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龙图腾网获悉江苏科技大学申请的专利比色法快速测定热致乳清蛋白和酪蛋白结合度的方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN116519621B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-09-16发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202310351872.1，技术领域涉及：G01N21/33；该发明授权比色法快速测定热致乳清蛋白和酪蛋白结合度的方法是由赵正涛;王秀菊;李奕璇;杜晓垚设计研发完成，并于2023-04-04向国家知识产权局提交的专利申请。

本比色法快速测定热致乳清蛋白和酪蛋白结合度的方法在说明书摘要公布了：本发明属于分析检测技术领域，涉及一种比色法快速测定热致乳清蛋白和酪蛋白结合度的方法，先测定乳品的中的变性乳清蛋白占总蛋白的比例，然后将未同酪蛋白结合乳清蛋白去除，再将二硫键的破坏及蛋白质沉淀物的洗涤，再将蛋白沉淀物的重新溶解，测量空白样和样品在280nm的吸光度，得A280,blank和A280值；再测412nm的吸光度值，得A412，DTNB和A412，blank值，OD值＝A412，DTNB‑A412，blankA280‑A280,blank，绘制标准工作曲线；待测乳品经上述步骤后测得OD值，由标准工作曲线查得变性乳清蛋白同总蛋白比值，按照公式C酪％＝C总100‑C总×100，计算乳清蛋白和酪蛋白的结合度。本发明缩短了样品准备流程、降低了测量成本，提高了测量效率和重复性，所用试剂量小，操作简单。

本发明授权比色法快速测定热致乳清蛋白和酪蛋白结合度的方法在权利要求书中公布了：1.一种比色法快速测定热致乳清蛋白和酪蛋白结合度的方法，其特征在于，包括如下步骤： A.标准乳分别于65℃、75℃、85℃、95℃加热5min，得到不同乳清蛋白结合量的样品乳液，备用，测定样品中的变性乳清蛋白占总蛋白的比例，单位g100g； B.取100μL样品乳液与乙酸钠缓冲液按1:10体积比混合均匀后，离心去除上清液乳清，得到蛋白质，其中，所述乙酸钠缓冲液的pH值4.5； C.将离心所得蛋白质控水后，添加800μL的二硫苏糖醇（DTT）试剂，于45℃、1600rpm震荡条件下加热5min，充分溶解，再添加820μL三氯乙酸溶液，涡流震荡混合均匀，静置5min后离心得蛋白质沉淀物；用乙酸钠缓冲液溶液对蛋白质沉淀物进行洗涤，涡流分散5min后，离心去除上清液，沥干，其中，所述三氯乙酸溶液的质量分数为24%，所述乙酸钠缓冲液的pH值4.5； D.向沥干后的蛋白质添加1mL三羟甲基氨基甲烷-尿素-甘氨酸缓冲液，于45℃、1600rpm震荡条件下加热5min，充分溶解，离心，其中，所述三羟甲基氨基甲烷-尿素-甘氨酸缓冲液的pH值8.3； E.吸取200μL样品上清液至比色皿中，添加800μL三羟甲基氨基甲烷-尿素-甘氨酸缓冲液混合均匀，空白样为1mL的三羟甲基氨基甲烷-尿素-甘氨酸缓冲液，测量空白样和样品在280nm的吸光度，得A280,blank和A280值， 分别向盛有空白样和样品的比色皿中添加100μLDTNB试剂，混合均匀，5min后测412nm的吸光度值，得A412，DTNB和A412，blank值，计算公式为OD值=A412，DTNB-A412，blankA280-A280,blank， 将测得的系列样品的OD值绘制成标准工作曲线，其中横坐标为变性乳清蛋白同总蛋白比值C乳清:C总，单位g100g，纵坐标为OD值； F.待测乳品按照步骤B-E测得OD值，由标准工作曲线查得变性乳清蛋白和总蛋白比值，按照公式C酪（%）=C总100-C总×100，计算乳清蛋白和酪蛋白的结合度C酪，单位g100g。

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