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龙图腾网获悉福建医科大学附属第一医院申请的专利一种连接酶结合核酸外切酶“零背景”检测CYP2C19*2基因型的电化学方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN115109855B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-09-16发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202210274079.1，技术领域涉及：C12Q1/6888；该发明授权一种连接酶结合核酸外切酶“零背景”检测CYP2C19*2基因型的电化学方法是由刘周杰;陈锦元;杨良永;林新华;许雄伟设计研发完成，并于2022-03-20向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种连接酶结合核酸外切酶“零背景”检测CYP2C19*2基因型的电化学方法在说明书摘要公布了：本发明公开一种连接酶结合核酸外切酶“零背景”检测CYP2C19*2基因型的电化学方法。特点是选用生物样品检测中稳定性较强的电活性指示剂亚甲蓝（MB）修饰信号探针，作为电信号来源，结合两种酶促反应特异性扩增、剪切的特性，仅当CYP2C19*2存在时，MB修饰长ssDNA才会被指数扩增出来，随后，此ssDNA通过“倒立型”结构形式被具有筛选ssDNA特性的高密度DNA自组装单分子层捕获杂交，MB靠近金电极表面，发生电子传递，最后，使用方波伏安法（SWV）搜集电信号。在人全血临床样品检测中，本发明可区分CYP2C19*2的三种基因型，且实现了“零背景”空白检测。此外，本发明对如何降低检测背景信号具有较为重要的设计参考价值，同时可为个体化药物基因型检测方法提供新思路、新方向。

本发明授权一种连接酶结合核酸外切酶“零背景”检测CYP2C19*2基因型的电化学方法在权利要求书中公布了：1.一种连接酶结合核酸外切酶“零背景”检测CYP2C19*2基因型的电化学方法，其特征在于：1热稳定连接酶为Ampligase，可特异性识别DNA单碱基错配，核酸外切酶为Lambda核酸外切酶，可从dsDNA的5'平末端剪切成ssDNA，两种工具酶参加的酶促反应在同一均相溶液中可指数扩增出MB修饰长ssDNA；2能实现“零背景”空白检测；3在人全血基因组DNA检测中，能够区分CYP2C19*2的三种基因型CYP2C19*1*1、CYP2C19*1*2、CYP2C19*2*2； 所述MB修饰长ssDNA指数扩增步骤如下：在同一均相溶液中，当目标基因MT存在时，四条引物首先在Ampligase作用下，经过连接酶链式反应LCR指数扩增出MB修饰长dsDNA，然后在Lambda核酸外切酶作用下，MB修饰长dsDNA被剪切为MB修饰长ssDNA；LCR反应体系如表1所示； 表1LCR反应体系50µL ； 所述LCR的反应过程为1）预变性；2）杂交，连接，变性为一个热循环，共30个循环获得MB修饰长dsDNA；3）4℃保存；随后在上述反应产物中加入Lambda核酸外切酶进行酶切反应，获得MB修饰长ssDNA； 所述的“零背景”空白检测得益于以下过程：1引物设计：如表2所示，四条LCR引物，信号探针SPMB的5’端修饰MB，其余引物A1，A2，AP的5’端修饰-PO4 3-，供Lambda核酸外切酶识别剪切，且两对引物互补为A2SPMB和A1AP，其中A1和A2分别为MT的一半，捕获探针CP3’端修饰-SH，5’端有一段12nt序列与AP3’端的12nt序列互补；2所述的MB修饰长ssDNA，作为唯一电化学信号来源，在指数扩增后与所述CP在金电极表面以“倒立型”结构形式杂交，使得MB靠近金电极表面，易发生电子传递；3由所述CP构建的高密度DNA自组装单分子层具有筛选ssDNA性能，当且仅当所述MT存在时，两种酶促反应结合指数扩增出MB修饰长ssDNA，才可被所述CP捕获，MB与金电极发生电子传递，产生电化学信号； 表2CYP2C19*2引物探针序列 ； 下划线标记的碱基表示突变位点或部分碱基12nt互补位点，加粗的碱基为电活性指示剂修饰位点。

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