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龙图腾网获悉中国水产科学研究院黑龙江水产研究所申请的专利一种无肌间刺鲫品系培育方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN113151361B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-09-16发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202110478410.7，技术领域涉及：C12N15/89；该发明授权一种无肌间刺鲫品系培育方法是由匡友谊;郑先虎;佟广香;孙志鹏;曹顶臣;闫婷;徐欢;董乐;杨笑星;刘天奇;张潭;张婷婷;孙效文设计研发完成，并于2021-04-30向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种无肌间刺鲫品系培育方法在说明书摘要公布了：一种无肌间刺鲫品系培育方法，它涉及一种水产养殖品种培育方法。为对鲫肌间刺进行遗传改良，本发明提出了一种通过基因敲除bmp6基因培育少或无肌间刺鲫的方法。培育方法：针对bmp6基因在鲫基因组中的2个拷贝bmp6a和bmp6b分别设计敲除靶位点，然后通过2轮基因敲除和筛选，获得F2代bmp6a和bmp6b双基因突变纯合系，然后利用F2代bmp6a和bmp6b双基因突变纯合系进行扩繁形成无肌间刺鲫新品系。本发明方法获得肌间刺数量在20枚以下和无肌间刺的鲫品种。

本发明授权一种无肌间刺鲫品系培育方法在权利要求书中公布了：1.一种无肌间刺鲫品系培育方法，其特征在于按以下步骤进行无肌间刺鲫品系培育： 针对bmp6基因在鲫基因组中的2个拷贝bmp6a和bmp6b分别设计敲除靶位点，然后通过2轮基因敲除和筛选，获得F2代bmp6a和bmp6b双基因突变纯合系，然后利用F2代bmp6a和bmp6b双基因突变纯合系进行扩繁形成无肌间刺鲫新品系； 其中，用bmp6a或bmp6b或bmp6a和bmp6b上对应的sgRNA与Cas9蛋白混合后显微注射鲫单细胞期胚胎，进行第一轮基因敲除，构建F0代群体，然后F0代群体养殖3~5个月进行PIT标记和DNA提取，再进行测序确定鲫个体体细胞突变的等位基因及突变率，选取体细胞突变系且体细胞突变率为95%以上的F0代个体作为亲本制备0代受精卵； 用bmp6a或bmp6b或bmp6a和bmp6b上对应的sgRNA与Cas9蛋白混合后显微注射0代受精卵，进行第二轮基因敲除，构建F1代群体，然后F1代群体养殖3~5个月进行PIT标记和DNA提取，再进行测序确定鲫个体体细胞突变的等位基因及突变率，选取体细胞bmp6a和bmp6b双基因突变系且体细胞突变率为95%以上的F1代作为亲本进行繁殖，构建F2代，再从F2代中选取bmp6a和bmp6b双基因突变纯合系； 其中，bmp6基因的敲除靶位点如表1所示， 表1 基因 sgRNA编号 基因组坐标 外显子 靶位点序列 sgRNA上游引物 bmp6a CAA1 NC_039266.1:5784476 Exon1 GGTAGCAGTTCTGCACTAGACGG TTCTAATACGACTCACTATAGGTAGCAGTTCTGCACTAGAGTTTTAGAGCTAGA CAA2 NC_039266.1:5784523 Exon1 CCAGCGGAGGTTGCGGACTCAGG TTCTAATACGACTCACTATAGCCAGCGGAGGTTGCGGACTCGTTTTAGAGCTAGA CAA3 NC_039266.1:5784562 Exon1 GAAAGAGATTCTGTCCATACTGG TTCTAATACGACTCACTATAGGAAAGAGATTCTGTCCATACGTTTTAGAGCTAGA CAA4 NC_039266.1:5815487 Exon2 TCTTTATGGTGTCTTCTCTGTGG TTCTAATACGACTCACTATAGTCTTTATGGTGTCTTCTCTGGTTTTAGAGCTAGA CAA5 NC_039266.1:5815527 Exon2 GGCCTCTCCCTCTGGAATCTGGG TTCTAATACGACTCACTATAGGCCTCTCCCTCTGGAATCTGTTTTAGAGCTAGA CAA6 NC_039266.1:5815558 Exon2 TGCAGAATTCAGGATCTACAAGG TTCTAATACGACTCACTATAGTGCAGAATTCAGGATCTACAGTTTTAGAGCTAGA bmp6b CAA7 NC_039291.1:8127537 Exon1 GGCAGGTAGTAGTTCTGTACTGG TTCTAATACGACTCACTATAGGCAGGTAGTAGTTCTGTACGTTTTAGAGCTAGA CAA8 NC_039291.1:8127477 Exon1 AGCCCAACTTCATTCATCGGAGG TTCTAATACGACTCACTATAGAGCCCAACTTCATTCATCGGGTTTTAGAGCTAGA CAA9 NC_03929.1:8127425 Exon1 GAAAGAGATCCTGTCCATACTGG TTCTAATACGACTCACTATAGGAAAGAGATCCTGTCCATACGTTTTAGAGCTAGA CAA10 NC_03929.1:8097264 Exon2 GGCCTCTCCCTCTGGAATCTGGG TTCTAATACGACTCACTATAGGCCTCTCCCTCTGGAATCTGTTTTAGAGCTAGA CAA11 NC_039291.1:8097233 Exon2 AGCAGAATTCAGGATCTACAAGG TTCTAATACGACTCACTATAGAGCAGAATTCAGGATCTACAGTTTTAGAGCTAGA ； 其中，采用如表1所示的sgRNA上游引物和序列为5’-GATCCGCACCGACTCGGTGCCACTTTTTCAAGTTGATAACGGACTAGCCTTATTTTAACTTGCTATTTCTAGCTCTAAAAC-3’的sgRNA下游引物，进行sgRNA体外合成；sgRNA体外扩增体系为：10mMsgRNA上游和下游引物各2.5mL、2×DreamTaqMastermix25mL、无酶水补充至50mL；sgRNA体外扩增程序为95℃变性3min，之后30个循环设置为95℃30s、58℃30s、72℃30s，72℃延伸5min；扩增后，将PCR产物纯化回收，然后利用RNA体外转录试剂盒进行sgRNA体外转录，每个靶位点建立30ml反应体系：sgRNAPCR回收产物1mg、NTPBufferMix10mL、T7RNAPolymeraseMix2mL，用无酶水补足30mL；37℃转录4h，反应结束加入20ml无酶的水，混匀后加入2mlDNaseI，在37℃消化15min，去除未反应的DNA。

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