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龙图腾网获悉浙江工业大学申请的专利一种弗氏链霉菌不同发酵时期差异代谢物的分析方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN119915933B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-09-23发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202510100344.8，技术领域涉及：G01N30/02；该发明授权一种弗氏链霉菌不同发酵时期差异代谢物的分析方法是由朱培曦;刘艳妮;吴杰群设计研发完成，并于2025-01-22向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种弗氏链霉菌不同发酵时期差异代谢物的分析方法在说明书摘要公布了：本发明公开了一种弗氏链霉菌不同发酵时期差异代谢物的分析方法，包括：弗氏链霉菌细胞收集及淬灭，胞内代谢物提取，LC‑MS检测，数据处理与分析。该方法通过非靶向代谢组学方法对弗氏链霉菌不同发酵时期样品进行研究，分析弗氏链霉菌细胞发酵过程中主要差异代谢物种类、丰度及代谢通路，阐明差异代谢物影响弗氏链霉菌细胞发酵的调控机制，从而促进弗氏链霉菌的代谢组学及代谢工程研究，进一步提高其工业生产应用价值。

本发明授权一种弗氏链霉菌不同发酵时期差异代谢物的分析方法在权利要求书中公布了：1.一种弗氏链霉菌不同发酵时期差异代谢物的分析方法，其特征在于，包括如下步骤： 1）胞内代谢物处理： ①细胞收集与淬灭 取不同发酵时期的弗氏链霉菌发酵液，离心以除去培养基中大部分固体杂质，细胞沉淀经冲洗后加入溶液淬灭剂，快速混合涡旋、均质，置于低温条件下孵育，真空抽滤快速过滤，收集固体样品； ②代谢物提取 将处理后的固体样品置于离心管中，加入代谢物提取液及内标，涡旋均匀后，置于冰块中超声提取胞内代谢物，超声结束后离心，离心后得到的沉淀加入相同体积的提取液置于冰块上再次超声进行二次提取，超声结束后离心，合并两次上清液，离心后取上清过膜至进样小瓶进行液相色谱-质谱联用方法测定； 2）液相色谱-质谱联用方法测定； 3）数据处理及分析： 通过步骤2）测试得到的数据导入代谢组学处理软件进行基线过滤、峰识别、积分、保留时间校正、峰对齐和归一化处理，得到含保留时间、质荷比和峰强度信息的数据矩阵；其后进行特征峰搜库鉴定，将MS和MSMS质谱信息与Metlin、KEGG、PubChem数据库进行匹配，MS质量误差设置为小于10ppm，同时根据二级质谱匹配得分鉴定代谢物；使用方差分析对不同组的样本代谢物进行统计学分析，包括非监督模式下的主成分分析和监督模式下的PLS-DA分析，筛选出VIP＞1，具有显著性差异p0.05且化合物响应值差异变化大于2倍的化合物，即为组间的差异性代谢物；通过KEGG数据库对筛选出的差异代谢物进行代谢通路富集和整体变化分析； 步骤2）中的液相色谱-质谱联用方法测定的操作条件如下：液相参数：色谱柱：ACQUITYBEHC18柱，2.1mm×100mm，1.7μm；柱温：35℃；流速：0.2mLmin；进样体积：2μL；流动相A：0.1%甲酸水；流动相B：乙腈；梯度洗脱的程序如下：0-20min，流动相A的体积分数由95％减少至75%，流动相B的体积分数由5%增加至25％；20-25min，流动相A的体积分数由75%减少至10%，流动相B的体积分数由25%增加至90%；25-26min，流动相A的体积分数由10%增加至95%，流动相B的体积分数由90%减少到5%，26-30min，流动相A体积分数为95%，流动相B体积分数为5%； 质谱参数：质谱在正离子转换模式下进行全扫描测定，质量范围：mz50～1500；毛细管电压：3000V；干燥气流速：8Lmin；碎裂电压：160V；干燥气温度：325℃；鞘气温度：325℃；鞘气流速：11Lmin；雾化气压力：40psi。

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