江苏省中国科学院植物研究所张燕获国家专利权
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龙图腾网获悉江苏省中国科学院植物研究所申请的专利一种诱导薄壳山核桃茎产生转基因毛状根的方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119614615B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-09-23发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202411881855.X,技术领域涉及:C12N15/82;该发明授权一种诱导薄壳山核桃茎产生转基因毛状根的方法是由张燕;莫正海;宣继萍;胡龙娇;翟敏;贾展慧;王国明设计研发完成,并于2024-12-19向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种诱导薄壳山核桃茎产生转基因毛状根的方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种诱导薄壳山核桃茎产生转基因毛状根的方法,属于林木基因工程领域。本发明利用发根农杆菌对薄壳山核桃半木质化或木质化茎进行侵染,获得稳定的转基因毛状根,可在1‑2月内诱导发根,发根率高达94.43%、转基因阳性率可达98.38%。本发明提供了一种经济高效的非组培依赖型转基因方法,且明确转基因根能够用于基因功能验证,该方法突破了薄壳山核桃稳定遗传转化困难的技术障碍,为功能基因的研究提供技术保障。
本发明授权一种诱导薄壳山核桃茎产生转基因毛状根的方法在权利要求书中公布了:1.一种诱导薄壳山核桃茎产生转基因毛状根的方法,其特征在于,包括以下步骤: 将含有目标基因的双元载体质粒转入发根农杆菌,制得重组发根农杆菌; 利用重组发根农杆菌侵染液侵染薄壳山核桃茎并进行共培养,之后进行生根培养; 所述目标基因为CiGATA12a基因,其核苷酸序列如SEQIDNO.3; 所述重组发根农杆菌侵染液的OD600为1.0,侵染时间为24h; 所述侵染和所述共培养的方法包括以下步骤: 环剥0.5-1cm薄壳山核桃茎部皮层,并刮除木质部残留的形成层组织后作为侵染部位; 用所述浸染液浸染所述侵染部位并将所述浸染部位密封包裹,之后置于20-28℃避光环境下共培养24-48h,移除密封包裹的材料,用培养基质覆盖所述浸染部位; 所述茎为薄壳山核桃种子苗或者品种苗的当年生半木质化茎; 所述发根农杆菌为C58C1; 所述重组发根农杆菌侵染液采用以下步骤制备:将重组发根农杆菌阳性单菌落在含有抗生素和乙酰丁香酮的LB培养基中培养至OD600为0.5-0.7,离心,收集菌体;用重悬液重悬所述菌体,得到所述重组发根农杆菌侵染液。
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