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中国计量大学梁培获国家专利权

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龙图腾网获悉中国计量大学申请的专利一种快速广谱检测沙门氏菌的方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119555662B

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-09-23发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202411788483.6,技术领域涉及:G01N21/65;该发明授权一种快速广谱检测沙门氏菌的方法是由梁培;郑丽;王玉峰;陈强;黄杰;舒海波设计研发完成,并于2024-12-06向国家知识产权局提交的专利申请。

一种快速广谱检测沙门氏菌的方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种快速广谱检测沙门氏菌的方法,涉及细菌检测技术领域。包括以下步骤:1标记SERS探针的制备;2Fe3O4@Au@Ag磁性复合材料的制备;3Fe3O4@Au@AgNPs与Ag@4MBA@AuNPs结合构建适配体传感器;4沙门氏菌的SERS检测。本发明基于贵金属纳米粒子与磁性复合材料构建的新型的表面增强拉曼散射SERS适配体传感器,根据竞争法原理产生沙门氏菌浓度越高,拉曼信号越弱的的反比关系,对不同沙门氏菌进行超灵敏的快速现场检测。

本发明授权一种快速广谱检测沙门氏菌的方法在权利要求书中公布了:1.一种快速广谱检测沙门氏菌的方法,其特征在于,包括以下步骤: 1标记SERS探针的制备 117mgAgNO3溶于100mL超纯水中,在剧烈搅拌下加热至沸腾,快速注入2mL1%柠檬酸三钠,煮沸40min,自然冷却至室温,得AgNPs溶液; 2取10mL步骤1制备的AgNPs溶液加入200μL0.1mM4MBA溶液,剧烈搅拌5h后,将混合物离心,并将沉淀重分散于2mL超纯水中,得Ag@MBANPs溶液,4℃保存备用; 3将222μL2%HAuCl4溶液、240μL0.2MNaOH溶液、3mL0.01MNa2SO3溶液加入4.538mL超纯水中,得Au生长溶液,在4℃条件下静置保存备用; 4将2mL步骤2制备的Ag@4MBANPs溶液、2.55mL超纯水、1mL5%PVP、200μL0.5MAA、200μL0.5MNaOH溶液、50μL0.1MNa2SO3溶液、4mL步骤3制备的Au生长液加入25mL玻璃小瓶中,磁力搅拌30min后,将溶液离心,并将沉淀重分散于2mL超纯水中,得Ag@4MBA@AuNPs溶液备用; 2Fe3O4@Au@Ag磁性复合材料的制备 5将1.35gFeCl3·6H2O和1gPEG加入40mL乙二醇中搅拌至澄清溶液,缓慢加入3.6gNaAc,强力搅拌30min,将混合溶液转移到铁氟龙内衬的不锈钢高压灭菌器中,200℃下反应10h,冷却至室温,交替使用超纯水和无水乙醇进行磁分离洗涤,重复3次,将洗涤产物放入真空干燥箱中60℃干燥10h待用,得Fe3O4MNPs; 6将100mL0.01%HAuCl4溶液在油浴锅条件下加热至煮沸,在剧烈搅拌条件下快速加入1mL1.0%柠檬酸三钠溶液,溶液先由浅黄色变为灰黑色,最后变为酒红色并保持不变,此时将溶液保持沸腾15min后在室温下冷却,得AuNPs溶液,4℃保存备用;将1.5mL0.1MAA溶液和0.5mL1mMAgNO3溶液混合到10mLAuNPs溶液中,剧烈搅拌30min后,酒红色变为橙黄色,将搅拌后的溶液离心,并将沉淀重分散在10mL超纯水中,得Au@AgNPs溶液备用; 7取40mg步骤5制备的Fe3O4MNPs加入到40mL10mgmLPEI溶液中超声混合2小时,得到Fe3O4@PEI溶液,用超纯水磁分离洗涤3次,以去除多余的PEI,得Fe3O4@PEI;将10mgFe3O4@PEI加入到100mL步骤6制备的Au@AgNPs溶液中,超声30min,将产物用磁铁分离,去离子水洗涤四次,重分散于4mL超纯水中,得Fe3O4@Au@AgMNPs溶液备用; 3Fe3O4@Au@AgNPs与Ag@4MBA@AuNPs结合构建适配体传感器 8取1mL步骤4制备的Ag@4MBA@AuNPs溶液加入20μL10μMSH-Apt溶液,在室温下下孵育12h,离心去除过量的SH-Apt,将产物用PBS缓冲液洗涤3次,并重分散在1mL的PBS缓冲液中,得Ag@4MBA@Au-AptNPs溶液; 9取1mL步骤7制备的Fe3O4@Au@AgMNPs溶液加入40μL5μMSH-cDNA溶液,室温下用数字振荡器振荡孵育12h,再用2μMMCH处理1h,阻断未结合位点,用乙醇磁分离洗涤后收集产物,加入1mLPBS缓冲液,制得Fe3O4@Au@Ag-cDNAMNPs溶液; 10取900μL步骤8制备的Ag@4MBA@Au-AptNPs溶液和600μL步骤9制备的Fe3O4@Au@Ag-cDNAMNPs溶液混合,在数字振荡器上轻摇孵育1h,将混合物进行磁分离洗涤3次,重分散在原始体积的PBS缓冲液中,得到了Ag@4MBA@Au-Fe3O4@Au@Ag磁性复合纳米颗粒溶液,即为SERS适配体传感器; 4沙门氏菌的SERS检测 将50μL样品加入到100μL步骤10制备的Ag@4MBA@Au-Fe3O4@Au@Ag磁性复合纳米颗粒溶液中,涡旋振荡2min,由于适配体与沙门氏菌之间的优先结合,在竞争结合体系中,部分Ag@4MBA@Au-Apt从Fe3O4@Au@Ag-cDNA中分离出来,然后通过磁分离将上清液中脱离的Ag@4MBA@Au-Apt移除,最后将沉淀物重新分散在10μL的PBS缓冲液中,并放在干净的硅芯片上烘干,使用便携式拉曼光谱仪进行检测分析。

如需购买、转让、实施、许可或投资类似专利技术,可联系本专利的申请人或专利权人中国计量大学,其通讯地址为:310000 浙江省杭州市下沙高教园区学源街258号;或者联系龙图腾网官方客服,联系龙图腾网可拨打电话0551-65771310或微信搜索“龙图腾网”。

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