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中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所马学军获国家专利权

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龙图腾网获悉中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所申请的专利用于诺如病毒和轮状病毒双重RT-RAP检测的引物探针组、试剂盒及其应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN115927746B

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-09-23发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202210967130.7,技术领域涉及:C12Q1/70;该发明授权用于诺如病毒和轮状病毒双重RT-RAP检测的引物探针组、试剂盒及其应用是由马学军;申辛欣;李逢钰;张瑞卿;田丰雨设计研发完成,并于2022-08-12向国家知识产权局提交的专利申请。

用于诺如病毒和轮状病毒双重RT-RAP检测的引物探针组、试剂盒及其应用在说明书摘要公布了:本发明提供了用于诺如病毒和轮状病毒双重RT‑RAP检测的引物探针组、试剂盒及其应用,属于分子生物学检测技术领域,所述引物探针组包括诺如病毒检测用引物探针组和轮状病毒检测用引物探针组;所以诺如病毒检测用引物探针组包括:GII‑RAA‑F、GII‑RAA‑R、GII‑F、GII‑R和GII‑P;所述轮状病毒检测用引物探针组包括:RV‑RAA‑F、RV‑RAA‑R、RV‑F、RV‑R和RV‑P。本发明的引物探针组可同时快速检测诺如病毒GII型和轮状病毒A组,灵敏度比普通qPCR高,反应时间大大缩短,且特异性好。

本发明授权用于诺如病毒和轮状病毒双重RT-RAP检测的引物探针组、试剂盒及其应用在权利要求书中公布了:1.一种非诊断目的的诺如病毒和轮状病毒同时检测的方法,包括以下步骤: 1)提取待测样品的核酸; 2)以所述核酸为模板,采用引物探针组依次进行RT-RAA扩增和qPCR扩增,收集荧光信号; 3)若诺如病毒对应的扩增曲线起峰且呈S型扩增,判定待测样品中含有诺如病毒,若诺如病毒对应的扩增曲线不起峰或无明显S型扩增,判定待测样品中不含诺如病毒;若轮状病毒对应的扩增曲线起峰且呈S型扩增,判定待测样品中含有轮状病毒,若轮状病毒对应的扩增曲线不起峰或无明显S型扩增,判定待测样品中不含轮状病毒; 所述引物探针组,包括诺如病毒检测用引物探针组和轮状病毒检测用引物探针组; 所述诺如病毒检测用引物探针组包括:GII-RAA-F、GII-RAA-R、GII-F、GII-R和GII-P; 所述GII-RAA-F、GII-RAA-R、GII-F、GII-R和GII-P的核苷酸序列分别如SEQIDNO.1~SEQIDNO.5所示; 所述轮状病毒检测用引物探针组包括:RV-RAA-F、RV-RAA-R、RV-F、RV-R和RV-P; 所述RV-RAA-F、RV-RAA-R、RV-F、RV-R和RV-P分别如SEQIDNO.6~SEQIDNO.10所示; 所述GII-P和RV-P分别标记不同的荧光基团; 所述RT-RAA扩增的反应体系包括280mM的乙酸镁水溶液、模板和RT-RAA反应混合液;所述乙酸镁水溶液、模板和RT-RAA反应混合液的体积比为0.5:1:9; 所述RT-RAA反应混合液以40μL计,包括以下组分:反应缓冲液25μL、无核酶水11μL、GII-RAA-F1μL、GII-RAA-R1μL、RV-RAA-F1μL和RV-RAA-R1μL; 所述RT-RAA扩增的反应程序:39~42℃、10~12min; 所述qPCR扩增的反应体系以40μL计,包括以下组分:Buffer12.5μL、无核酶水22.2μL、Taq热启动酶0.5μL、dNTP0.6μL、MgCl21.2μL、GII-F0.5μL、GII-R0.5μL、GII-P0.5μL、RV-F0.5μL、RV-R0.5μL和RV-P0.5μL; 所述qPCR扩增的反应程序:95℃、3min;95℃、15s,55℃、30s,72℃、30s,30个循环; 所述RT-RAA扩增和qPCR扩增的扩增体系采用正二十二烷进行间隔,具体为:在qPCR扩增的扩增体系中加入熔融的正二十二烷进行静置,正二十二烷浮于qPCR扩增的扩增体系之上,待所述正二十二烷凝固后,在凝固的正二十二烷上加入RT-RAA扩增的扩增体系; 所述RT-RAA扩增和qPCR扩增于带盖的管内进行;将除乙酸镁以外的RT-RAA扩增的扩增体系加入到凝固的正十二烷之上,将乙酸镁加到盖内,利用乙酸镁启动RT-RAA反应。

如需购买、转让、实施、许可或投资类似专利技术,可联系本专利的申请人或专利权人中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所,其通讯地址为:102206 北京市昌平区昌百路155号;或者联系龙图腾网官方客服,联系龙图腾网可拨打电话0551-65771310或微信搜索“龙图腾网”。

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