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龙图腾网获悉中国科学院大连化学物理研究所申请的专利一种基于可逆化学酶促标记的O-GlcNAc糖肽富集方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN116735726B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-09-23发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202210210278.6，技术领域涉及：G01N30/02；该发明授权一种基于可逆化学酶促标记的O-GlcNAc糖肽富集方法是由叶明亮;秦洪强;陈尧设计研发完成，并于2022-03-04向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种基于可逆化学酶促标记的O-GlcNAc糖肽富集方法在说明书摘要公布了：本发明公开了一种基于可逆化学酶促标记‑亲水作用色谱富集的O‑GlcNAc糖肽富集方法。具体涉及：基于Endo‑M等糖苷内切酶的突变体的转糖活性进行O‑GlcNAc糖肽的化学酶促标记，将带有噁唑啉结构的N‑糖链整体转接到O‑GlcNAc糖基上，然后利用亲水作用色谱对标记的O‑GlcNAc糖肽进行一步富集。针对富集获得的引入N‑糖链结构的O‑GlcNAc糖肽，利用野生型糖苷内切酶将标记糖链切除，实现O‑GlcNAc糖肽的无痕富集。与其它O‑GlcNAc糖肽富集技术相比，本发明具有O‑GlcNAc糖肽富集效率高、操作简便等优势，为O‑GlcNAc糖蛋白质组学的研究提供了一种新的解决思路和富集方法。

本发明授权一种基于可逆化学酶促标记的O-GlcNAc糖肽富集方法在权利要求书中公布了：1.一种O-GlcNAc糖肽可逆化学酶促标记与富集方法，其特征在于：该方法利用糖苷内切酶Endo-M的N175Q突变体向O-GlcNAc糖基上转移寡糖链以提升亲水性，进而利用麦芽糖亲水作用色谱材料进行O-GlcNAc延长糖肽的富集；针对富集的糖链，利用野生型的糖苷内切酶Endo-MWT和Endo-SWT进行标记糖链的切除，获得生物样品中的O-GlcNAc糖肽；具体步骤如下： 1O-GlcNAc糖肽的化学酶促标记，具体操作为：以噁唑啉结构的糖链CT作为标记试剂，噁唑啉结构的糖链CT组成为Gal2GlcNAc3Man3，终浓度为8~10mM，相对分子质量为1419.5，制备方法参见HuangW.etal.,2009,J.Am.Chem.Soc.p.2222，以终浓度为0.4~0.5μgμl的糖苷内切酶Endo-M的N175Q突变体于36~38℃下在pH7.1~7.3的180~220mM磷酸钠缓冲液中向生物肽段样品中的O-GlcNAc基团催化标记糖链； 2O-GlcNAc标记糖肽的富集，基于延长O-GlcNAc糖肽的亲水性强的特征，在室温下的78~82%乙腈ACN0.9~1.1%三氟乙酸TFA体系中利用环氧叠氮麦芽糖亲水作用色谱材料的非共价键作用实现对O-GlcNAc标记糖肽的选择性富集； 3O-GlcNAc糖肽的糖链切除，基于糖苷内切酶的酶切活性与特异性，于36~38℃下在pH6.3~6.5的45~55mM磷酸钠缓冲液中利用野生型的浓度为0.18~0.22μgμl的糖苷内切酶Endo-MWT和终浓度为0.45~0.55μgμl的Endo-SWT进行标记糖链的切除，以恢复O-GlcNAc糖基的结构。

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