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龙图腾网获悉北京航空航天大学杭州创新研究院;杭州乐为生医科技有限公司申请的专利一种基于邻近核酸扩增信号放大的超灵敏免疫检测方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN120249442B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-09-26发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202510738094.0，技术领域涉及：C12Q1/6804；该发明授权一种基于邻近核酸扩增信号放大的超灵敏免疫检测方法是由高阳;韩改净设计研发完成，并于2025-06-04向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种基于邻近核酸扩增信号放大的超灵敏免疫检测方法在说明书摘要公布了：本发明公开了医学检测技术领域的一种基于邻近核酸扩增信号放大的超灵敏免疫检测方法，包括步骤一、免疫结合；步骤二、酶切释放，释放发卡环DNA单链；步骤三、互补和酶连，添加T4连接酶将环状DNA单链环化；步骤四、滚环扩增；步骤六、检测，通过qPCR和原位寡核苷酸荧光标记检测方法定量和定位。本发明通过抗体上偶联的寡核苷酸DNA链上的发卡环结构保护互补序列避免产生非特异性环状DNA单链，并结合滚环扩增技术放大检测信号，抑制检测背景信号强度的同时增强检测信号的特异性，进一步提高检测的灵敏度。

本发明授权一种基于邻近核酸扩增信号放大的超灵敏免疫检测方法在权利要求书中公布了：1.一种基于邻近核酸扩增信号放大的超灵敏免疫检测方法，其特征在于：包括以下步骤： 步骤一、免疫结合，在样本中加入第一DNA抗体偶联探针（1）和第二DNA抗体偶联探针（2）结合抗原形成三明治免疫复合物； 步骤二、酶切释放，使用分枝结构内切酶切断第一DNA抗体偶联探针（1）和第二DNA抗体偶联探针（2）DNA发卡结构的5'端分枝处，释放与另一个偶联探针的寡核苷酸DNA链根部（4）互补的发卡环（6）DNA单链； 步骤三、互补和酶连，在抗体免疫结合形成的邻近作用影响下，第一DNA抗体偶联探针（1）和第二DNA抗体偶联探针（2）被切开的寡核苷酸DNA链相互互补，形成与两个偶联探针的寡核苷酸DNA链同时互补的具有两个缺口的环状DNA单链，且缺口处的单链末端相邻，添加T4连接酶将环状DNA单链环化； 步骤四、滚环扩增，添加phi29聚合酶进行环状DNA单链的滚环扩增； 步骤五、检测，通过qPCR检测滚环扩增产物上重复的特异性序列分析抗体（3）的含量，通过原位寡核苷酸荧光标记检测方法检测滚环扩增产物上重复的特异性序列在组织细胞中进行原位荧光成像； 其中，所述第二DNA抗体偶联探针（2）上偶联有DNA单链，DNA单链为发卡环（6）结构，且为3'端-5'端序列； 所述第一DNA抗体偶联探针（1）上偶联有部分双链DNA，其中一条DNA单链为发卡环（6）结构，且为3'端-5'端序列； 所述第一DNA抗体偶联探针（1）偶联的部分双链DNA中的发卡环（6）结构序列与第二DNA抗体偶联探针（2）偶联的DNA单链根部（4）序列反向互补，第二DNA抗体偶联探针（2）偶联的DNA单链发卡环（6）结构序列与第一DNA抗体偶联探针（1）偶联的部分双链DNA中暴露单链序列反向互补； 所述第一DNA抗体偶联探针（1）偶联的部分双链DNA中的发卡环（6）结构序列和第二DNA抗体偶联探针（2）偶联的DNA单链中的发卡环（6）结构序列长度均为8-15bp。

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