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龙图腾网获悉浙江大学申请的专利一种可实现细胞内目标核酸特定修饰可视化的原位成像方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN119530350B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-09-26发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202411722624.4，技术领域涉及：C12Q1/682；该发明授权一种可实现细胞内目标核酸特定修饰可视化的原位成像方法是由刘建钊;宓玉洁;高敏淞设计研发完成，并于2024-11-28向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种可实现细胞内目标核酸特定修饰可视化的原位成像方法在说明书摘要公布了：本发明提供一种可实现细胞内目标核酸特定修饰可视化的原位成像方法。该方法仅需三条具有不同功能的单链核酸：装配有识别核酸特定修饰组件的单链核酸支架、能特异性靶向目标核酸序列的单链核酸引物‑1、单链核酸引物‑2，便可完成对特定修饰与特定核酸序列的靶向并组成滚环扩增的信号放大体系，具有简便经济的特点，具有极高的商业化潜力。在原位滚环扩增后形成一条序列重复的长单链核酸，可富集特定的荧光探针进行成像，该处成像信号点即为目标核酸特定修饰位点所在的空间位置。本发明可与蛋白免疫荧光共用、可实现多种核酸的同时成像、可实现不同亚空间定位的核酸成像，使得该方法成为能够应用在多场景的多功能解决方案。

本发明授权一种可实现细胞内目标核酸特定修饰可视化的原位成像方法在权利要求书中公布了：1.一种可实现细胞内目标RNA特定m6A修饰可视化的原位成像方法，其特征在于，包括以下步骤： （1）修饰位点的单链核酸支架嫁接：将装配有识别RNA特定修饰组件的单链核酸支架与固定、通透处理后的细胞进行孵育，或将识别RNA特定修饰的组件与通透后的细胞进行孵育后再与单链核酸支架孵育，从而在特定修饰位点处嫁接上单链核酸支架，得到处理后的细胞； （2）目标RNA的识别：将能特异性靶向目标RNA序列的单链核酸引物-1、单链核酸引物-2与步骤（1）处理后的细胞进行孵育，使所述单链核酸引物-1和单链核酸引物-2与目标RNA相结合； （3）信号放大：在嫁接到修饰位点的单链核酸支架的辅助下，单链核酸引物-1被连接酶环化，随后作为单链核酸引物-2的引物延伸模板进行滚环扩增，对细胞内目标RNA特定修饰的信号进行原位放大； （4）信号可视化：使用能与环化后的单链核酸引物-1相杂化的荧光探针与滚环扩增后的细胞进行孵育，在激光共聚焦显微镜下捕捉到明显区别于背景信号的明亮的信号点，反映目标RNA上特定m6A修饰位点的亚细胞空间定位； 步骤（1）中，装配有识别核酸特定修饰组件的单链核酸支架包含如下组件： 修饰识别组件A，用于识别特定核酸修饰并与其结合； 单链核酸支架B，与单链核酸引物-1的首尾序列互补配对，用于协助连接酶环化单链核酸引物-1； 连接组件A，与修饰识别组件A直接结合，形成识别核酸特定修饰的组件； 连接组件B，与单链核酸支架B直接结合，形成单链核酸支架，与连接组件A相结合，用于将识别核酸特定修饰的组件与单链核酸支架相结合； 装配有识别核酸特定修饰组件的单链核酸支架的构建方法为： （1）构建识别核酸特定修饰的组件：设计并构建包含修饰识别组件A与连接组件A的融合蛋白表达质粒，在蛋白表达后进行纯化； （2）构建单链核酸支架：设计并固相合成包含连接组件B的单链核酸支架B并直接纯化，或将单链核酸支架B与连接组件B连接后纯化； （3）构建装配有识别核酸特定修饰组件的单链核酸支架：将步骤（1）和（2）所得产物混合，在连接组件A与连接组件B的特异性相互作用下，识别核酸特定修饰的组件与单链核酸支架结合，形成装配有识别核酸特定修饰组件的单链核酸支架； 所述修饰识别组件A为YTH，所述单链核酸支架B为Splint，所述连接组件A为HaloTag，所述连接组件B为DBCO-Halolinker。

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