中国计量科学研究院隋志伟获国家专利权
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龙图腾网获悉中国计量科学研究院申请的专利一种原奶中活菌总数的快检方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN115901709B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-10-03发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202211572555.4,技术领域涉及:G01N21/64;该发明授权一种原奶中活菌总数的快检方法是由隋志伟;王蒙;刘思渊;江游;龚晓云设计研发完成,并于2022-12-08向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种原奶中活菌总数的快检方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种原奶中活菌总数的快检方法,具体涉及食品微生物检测领域。所述方法包括使用第一处理液与第二处理液完成原奶样品预处理,得预处理样品;使用核酸染料对预处理样品进行第一荧光标记,并使用死菌特异性染料对预处理样品同时进行第二荧光标记,得到标记样品;使用高分辨率流式细胞仪对标记样品中颗粒的荧光信号进行检测;分别统计所述样品中第一荧光标记颗粒数与第二荧光标记颗粒数,依据数学模型将颗粒数转化为活菌总数。本发明的原奶中活菌总数的快检方法可以对细菌活性进行准确的表达,且可以同时表达出活菌和死菌的数量;具有细菌活性表征准确、测量时间短的特征,可在2小时内完成全部检测。
本发明授权一种原奶中活菌总数的快检方法在权利要求书中公布了:1.一种原奶中活菌总数的快检方法,其特征在于,包括: 步骤一,使用第一处理液与第二处理液完成原奶样品预处理,得预处理样品; 步骤二,使用核酸染料对预处理样品进行第一荧光标记,并使用死菌特异性染料对预处理样品同时进行第二荧光标记,得到标记样品; 步骤三,使用高分辨率流式细胞仪对标记样品中颗粒的荧光信号进行检测; 步骤四,分别统计所述样品中第一荧光标记颗粒数与第二荧光标记颗粒数,依据数学模型将颗粒数转化为活菌总数; 其中,第一处理液包含可去除原奶样品中脂质颗粒的温和去垢剂;第二处理液包含可消化原奶样品中蛋白颗粒的蛋白酶混合物; 所述第一处理液包含Triton X‑100,第二处理液包括蛋白酶K和胰蛋白酶; 所述核酸染料为红色荧光染料,选自SYTO17,SYTO59,SYTO60,SYTO61,SYTO62,SYTO63,SYTO64中的一种或几种; 所述死菌特异性染料为绿色荧光染料,具体为DiBAC43; 所述步骤四中,数学模型为; 其中,N为推导计算的平板计数法结果CFUmL,A为红色荧光单独表征的活菌数目cellsμL,B为绿色和红色荧光表征的死菌数目cellsμL,3为换算系数。
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