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龙图腾网获悉上海微谱检测科技集团股份有限公司申请的专利一种用于mRNA疫苗中polyA尾检测的方法及应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN116735731B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-10-03发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202310475157.9，技术领域涉及：G01N30/02；该发明授权一种用于mRNA疫苗中polyA尾检测的方法及应用是由黄卓;王红丽;刘志勇;李昊哲;郭钧设计研发完成，并于2023-04-27向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种用于mRNA疫苗中polyA尾检测的方法及应用在说明书摘要公布了：本发明涉及药物分析技术领域，尤其涉及IPCG01N30，更具体地涉及，一种用于mRNA疫苗中polyA尾检测的方法及应用。本发明提供了一种省时、省力、分辨率高的用于mRNA疫苗中polyA尾检测的方法，包括以下步骤：S1：对mRNA疫苗溶液中的mRNA进行酶切、磁珠纯化、洗脱回收，得到polyA尾片段；S2：利用液相色谱质谱联用仪LC‑MS对PolyA尾片段进行检测；本发明中的检测方法可实现单个核苷酸的检测，可检测多个寡核苷酸序列，进而准确地确定polyA分布范围，分辨率高；且前处理方法简单，检测时间短，大大提高稳定性，节省时间，可以作为mRNA疫苗的常用表征。

本发明授权一种用于mRNA疫苗中polyA尾检测的方法及应用在权利要求书中公布了：1.一种用于mRNA疫苗中polyA尾检测的方法，其特征在于，包括以下步骤： S1：对mRNA疫苗溶液中的mRNA进行酶切、磁珠纯化、洗脱回收，得到polyA尾片段，具体包括： 步骤M1：酶切：取100～150μL mRNA疫苗溶液在90～100℃加热3～8min，然后放置在冰上迅速降温至室温；再加入15～25μL 10x RNase H buffer和5～15μL RNase T1酶，混匀后于37℃反应3h； 步骤M2：磁珠纯化：移取磁珠溶液于离心管中，将其放在磁力架上静置后弃去液体；从磁力架中取出离心管，加入结合缓冲液后放在磁力架上静置，弃去液体，重复两次；向清洗后的磁珠中加100～200μL结合缓冲液和经过M1步骤处理后的mRNA疫苗溶液，室温条件下震荡孵育10～20min后，置于磁力架上收集磁珠，弃液体； 步骤M3：洗脱回收：将步骤M2得到的磁珠中加100～200μL清洗缓冲液，置于磁力架上1～3min后，弃液体，重复两次；再加入100～200μL 100mM乙酸铵，置于磁力架上1～3min后，弃液体，重复三次；将80 .0～120 .0μL已加热至80℃的质量分数为75％甲醇添加到清洗后的磁珠中；在80℃条件下孵育5min，在磁力架上放置1～3min后，收集液体，在室温条件下冻干，得到冻干粉； 步骤M4：样品分析：将步骤M3得到的冻干粉中加入60 .0～100 .0μL 100μMEDTA溶液复溶； S2：利用液相色谱质谱联用仪LC‑MS对Poly A尾片段进行检测；其中LC‑MS中液相色谱的流动相由水相A相和有机相B相组成；所述的A相包括六氟异丙醇和N,N‑二异丙基乙胺和水；所述B相包括纯甲醇；质谱扫描采用负离子模式； 所述S2中的利用液相色谱质谱联用仪LC‑MS对 Poly A尾片段进行检测时，其中液相色谱中的操作步骤如下：采用UPLC系统进行分离，分析样品置于8℃自动进样器中，柱温75℃，流速为300 μLmin，进样量45 μL；相关液相色谱梯度设置如下：0‑2min，B相维持在5%；2‑10min，B相从5%线性变化至50%；10‑10.5min，B相从50%线性变化至90%；10.5‑12.5min，B相维持在90%；12.5‑13.0min，B相从90%线性变化至5%；13.0‑15.0min，B相维持在5%； 所述S2中的利用液相色谱质谱联用仪LC‑MS对Poly A尾片段进行检测时，其中质谱的操作步骤如下：采用Acquity H‑Class Plus Xevo G2‑XS质谱仪在负离子模式下进行质谱分析；条件如下：项目：系统设置；质量范围：400mz～3000mz；毛细管电压：2 .5kV；锥孔电压：80V；脱溶剂温度：350℃；锥孔气大小：50Lh；脱溶剂大小：700Lh。

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