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龙图腾网获悉复旦大学附属肿瘤医院申请的专利一种mRNA快速构建方法及其应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN120082637B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-10-03发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202510085568.6，技术领域涉及：C12Q1/686；该发明授权一种mRNA快速构建方法及其应用是由黄胜林;余洪武设计研发完成，并于2025-01-20向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种mRNA快速构建方法及其应用在说明书摘要公布了：本发明公开了一种mRNA快速构建方法及其应用。所述方法利用预先制备的双链DNA片段库、全长扩增引物和化学合成的寡核苷酸目标蛋白引物，在高保真DNA聚合酶的催化合成下实现无菌环境的快速组装合成，合成的线性双链DNA经过简单的纯化即可用于体外转录反应合成目标mRNA。这种快速的mRNA构建方法可以用于快速合成编码单个肿瘤抗原表位的肿瘤mRNA疫苗，进一步可混合形成mRNA疫苗库用于肿瘤治疗，大大缩短肿瘤疫苗的开发周期和成本。此外，本发明还基于此快速的mRNA构建方法开发了肿瘤患者新抗原的快速鉴定方法，相比利用抗原多肽文库鉴定抗原免疫原性，本方法可以大大降低成本和缩短鉴定时间。

本发明授权一种mRNA快速构建方法及其应用在权利要求书中公布了：1.一种快速的单表位抗原mRNA构建方法，其特征在于，包括如下步骤：1预合成DNA片段库和全长扩增引物；2目标蛋白引物设计；3第一轮搭桥扩增；4第二轮体外转录模板扩增；5体外转录合成目标蛋白mRNA； 其中所述步骤1中所述DNA片段库包括5’UTR，3’UTR，信号肽编码序列，跨膜结构域编码序列；所述信号肽为人或小鼠的主要组织相容性抗原I类蛋白的信号肽MHC‑I SP；所述跨膜结构域为人或小鼠的主要组织相容性抗原I类蛋白的跨膜结构域MITD；所述5’UTR和主要组织相容性抗原I类蛋白的信号肽编码序列融合，即5’UTR+MHC‑I SP；所述MITD编码序列和3’UTR融合，即MITD+3’UTR；所述全长扩增引物选自含T7启动子的正向引物和含polyT的反向引物；其中所述含T7启动子的正向引物的3’端与5’UTR正义链的5’端重叠，所述含polyT的反向引物的3’端与3’UTR正义链的3’端互补配对；所述重叠或互补配对的碱基数量为12‑30； 其中步骤2中所述目标蛋白为抗原，抗体，细胞因子及其他治疗性蛋白；所述抗原为病毒抗原、肿瘤抗原或细菌抗原；所述抗原的长度为20‑30个氨基酸； 其中采用不同数量的引物组装不同长度的插入片段；所述引物数量为2‑8条；每条所述引物长度为42‑78nt； 其中步骤2所述抗原引物具有12至30nt的与前片段和后片段互补配对的序列；所述前片段为前段与之相连的引物、5’UTR或信号肽编码序列；所述后片段为后段与之相连的引物、3’UTR或跨膜结构域编码序列； 其中所述步骤3的第一轮搭桥扩增反应体系包括抗原引物、5’UTR+MHC‑I SP、MITD+3’UTR和PCR预混液；所述扩增程序为198℃ 30s；298℃ 10s，60℃ 10s， 72℃ 15s，循环7次；372℃ 30s，4℃ ∞； 其中所述步骤4第二轮体外转录模板扩增包括向步骤3的反应中加入含启动子的正向引物，含polyT的反向引物；所述扩增程序为：198℃ 30s；298℃ 10s，63℃ 10s， 72℃ 15s，循环25次；372℃ 30s，4℃ ∞。

如需购买、转让、实施、许可或投资类似专利技术，可联系本专利的申请人或专利权人复旦大学附属肿瘤医院，其通讯地址为：200032 上海市徐汇区东安路270号；或者联系龙图腾网官方客服，联系龙图腾网可拨打电话0551-65771310或微信搜索“龙图腾网”。