福建农林大学;福州康来生物科技有限公司倪林获国家专利权
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龙图腾网获悉福建农林大学;福州康来生物科技有限公司申请的专利一种香樟芝麻素类成分抑菌活性测定方法及应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN115060667B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-10-10发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202210416780.2,技术领域涉及:G01N21/31;该发明授权一种香樟芝麻素类成分抑菌活性测定方法及应用是由倪林;郑威;吴美婷;颜武华设计研发完成,并于2022-04-20向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种香樟芝麻素类成分抑菌活性测定方法及应用在说明书摘要公布了:本发明公开的一种香樟芝麻素类成分抑菌活性测定方法及应用,属于抑菌活性测定技术领域。本发明对芳樟分离纯化物芝麻素和9‑羟基芝麻素进行了抑菌研究,发现9‑羟基芝麻素和芝麻素对链孢粘帚霉病菌均存在较好的抑制活性,为研究芳樟的抑菌活性提供了基本依据。
本发明授权一种香樟芝麻素类成分抑菌活性测定方法及应用在权利要求书中公布了:1.一种香樟芝麻素类成分抑菌活性测定方法,其特征在于,所述香樟芝麻素类成分抑菌活性测定方法包括以下步骤: 步骤一、从芳樟中分离纯化得到两个化合物,分别为:9-羟基芝麻素和芝麻素,采用菌丝生长速率抑制法,实现9-羟基芝麻素、芝麻素两个化合物对四种病菌的抑菌活性测定;所述9-羟基芝麻素、所述芝麻素两个化合物对四种病菌的抑菌活性测定的方法为:首先,准确称量3mg的9-羟基芝麻素和芝麻素,加入2mL溶剂,按甲醇:乙酸乙酯=10:1配置进行溶解,然后将配好的溶液加入38mL的液体PDA培养基中,配置成最终浓度为75mgL的含药培养基,空白对照组为同样溶解条件的溶液;使用孔径为0.5cm的打孔器打取菌丝生长一致的菌饼苹果黑腐皮壳病菌、西瓜尖孢镰孢菌、瓜果腐霉菌、链孢粘帚霉病菌,接于相应培养基中,每个处理组设置3个重复试验,将接好的菌种放置于恒温生化培养箱中培养6天,温度为28℃; 步骤二、采用菌丝生长速率抑制法,测定芝麻素、9-羟基芝麻素对链孢粘帚霉病菌的毒力大小;测定所述芝麻素、所述9-羟基芝麻素对链孢粘帚霉病菌的毒力大小的方法为:将两个化合物按甲醇:乙酸乙酯比例为10:1进行溶解,然后设置不同浓度梯度,分别配制成浓度为25、50、100、200、400μg·mL-1的含药PDA培养基,接种培养;阳性对照组为杀菌剂丁子香酚,评价两个化合物对链孢粘帚霉病菌的抑菌活性,以药剂浓度的对数值作为自变量,其浓度相对应的抑制率为因变量,计算毒力回归方程、有效中浓度值和相关系数; 步骤三、芝麻素和9-羟基芝麻素对菌丝干重的测定; 步骤四、芝麻素和9-羟基芝麻素对病菌细胞膜丙二醛含量的测定; 步骤五、芝麻素和9-羟基芝麻素对病菌细胞膜相对电导率的测定; 步骤六、芝麻素和9-羟基芝麻素对病菌还原糖含量影响的测定; 步骤七、芝麻素和9-羟基芝麻素对病菌保护酶活性影响的测定;所述芝麻素和所述9-羟基芝麻素对病菌保护酶活性影响的测定方法为: 1所述芝麻素和所述9-羟基芝麻素对过氧化氢酶活性的测定,方法为:采用紫外分光光度法,取1mL不同处理的菌丝提取液,分别加入5%硫酸钛和浓氨水反应,反应后4000rmin离心8min,加入5%的硫酸5mL至完全溶解,以蒸馏水为空白对照组,每个处理组重复三次,在240nm下测定吸光度; 2所述芝麻素和所述9-羟基芝麻素对超氧化物歧化酶活性的测定,方法为:采用氮蓝四唑法,取1mL各处理组的菌丝提取液,分别加入50mmol·L-1缓冲液、pH7.8的13mmol·L-1甲硫氨酸、100nmol·L-1EDTA溶液、75μmol·L-1NBT溶液、2μmol·L-1核黄素溶液混匀;蒸馏水为空白对照组,分别测定各处理组在560nm处的吸光度值; 3所述芝麻素和所述9-羟基芝麻素对过氧化物酶活性的测定,方法为:取100μL各处理组的菌丝提取液,分别加入3mLpH为5.6的磷酸缓冲液,1mL的愈创木酚溶液,1mL1%的双氧水;在38℃的水浴中混合反应,在470nm处测定吸光度。
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