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龙图腾网获悉合肥贝壳派创新科技有限公司申请的专利一种高纯度重组贻贝粘蛋白的制备方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN119529049B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-10-10发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202411765778.1，技术领域涉及：C07K14/435；该发明授权一种高纯度重组贻贝粘蛋白的制备方法是由崔海涛;陈磊;蒋磊;李楠楠;陈凯设计研发完成，并于2024-12-04向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种高纯度重组贻贝粘蛋白的制备方法在说明书摘要公布了：本发明公开了一种高纯度重组贻贝粘蛋白的制备方法，属于重组蛋白制备技术领域，本发明采用融合蛋白改善目标蛋白表达的思路，将厚壳贻贝Mfp‑3的氨基酸序列和紫贻贝preCol‑D的氨基酸序列的部分肽段进行融合表达，并结合诱导、酪氨酸酶修饰、分离纯化工艺的改善，获得纯度高、内毒素含量低、粘附性能好的重组贻贝粘蛋白，本发明重组贻贝粘蛋白的成功制备为重组贻贝粘蛋白的工业化生产提供新的思路，为重组贻贝粘蛋白的多领域应用提供原料支持，实现根据应用需求制备定制序列重组贻贝粘蛋白，推进贻贝粘蛋白在不同领域的应用。

本发明授权一种高纯度重组贻贝粘蛋白的制备方法在权利要求书中公布了：1.一种高纯度重组贻贝粘蛋白的制备方法，其特征在于，包括如下步骤： S1、根据重组贻贝粘蛋白的氨基酸序列，针对宿主系统进行密码子优化，将设计完成的核苷酸序列送生工生物工程上海股份有限公司全基因合成，将合成的序列用限制性内切酶NcoISacI双酶切后连接到pET28a空质粒中； 所述的重组贻贝粘蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示； S2、将重组后的产物转化到E.coliTOP10感受态细胞中，并通过Kana抗性平板筛选得到阳性条带的单菌落，抽提质粒，测序正确的质粒即为构建好的pET28a-Mfp3D表达载体； S3、将得到的pET28a-Mfp3D表达载体转化到表达宿主BL21DE3感受态细胞中，并通过Kana抗性平板筛选得到单菌落，PCR凝胶电泳验证阳性并测序正确的菌株，即为重组贻贝粘胶蛋白表达工程菌； S4、将重组贻贝粘蛋白表达工程菌接种至LB培养基中进行发酵，获得重组菌发酵液； S5、将所得的重组菌发酵液摇菌培养至OD600＝0.6～0.8，加入诱导剂，放入摇床中进行诱导培养，诱导培养结束后收集菌体，用缓冲液A重悬并超声破碎，离心之后收集上清液，上清液穿过镍柱2次后，再用缓冲液B洗脱杂蛋白，最后用缓冲液C回收目的蛋白； 所述的缓冲液A：咪唑8～10mM，尿素6～10M，NaH2PO496～106mM，Tris-HCl8～12mM，pH＝7.7～8.2； 缓冲液B：咪唑25～35mM，尿素6～10M，NaH2PO496～106mM，Tris-HCl8～12mM，pH＝6～6.8； 缓冲液C：咪唑250～350mM，尿素6～10M，NaH2PO496～106mM，Tris-HCl8～12mM，pH＝4.3～4.9； S6、向步骤S5的含有目的蛋白的缓冲液C中加入修饰剂，室温反应6h后，收集修饰后的酶反应液； 所述的修饰剂的组成为：硫酸铜20～26μM、抗坏血酸10～12mM、中药提取物60～70mM，底物体积1～2％的酪氨酸酶； 所述中药提取物的制备方法为：将洋甘菊60～80份、向日葵80～90份、金银花30～40份、丹参4～10份、雷公藤1～3份分别在-100～-60℃条件下深冷粉碎后，分别加水搅匀后混合，然后加热煮沸，保持沸腾10～16min后，小火熬煮8～10h后过滤，滤液浓缩至1～2gmL； S7、用Ni-NTA柱亲和层析方法对酶反应液中的重组贻贝粘蛋白进行洗脱纯化，最后进行冷冻干燥，即可获得冻干粉纯品。

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