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龙图腾网获悉中国农业大学申请的专利一种毕赤酵母高效基因编辑系统、其构建方法及在高产虫草素工程菌株中的应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN120366358B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-10-10发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202510858717.8，技术领域涉及：C12N15/81；该发明授权一种毕赤酵母高效基因编辑系统、其构建方法及在高产虫草素工程菌株中的应用是由郭岩彬;赵炳杰;石金蕾;赵若羽;高杉;魏雨泉设计研发完成，并于2025-06-25向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种毕赤酵母高效基因编辑系统、其构建方法及在高产虫草素工程菌株中的应用在说明书摘要公布了：本发明涉及基因编辑技术、生物工程以及应用微生物发酵领域，公开了毕赤酵母高效基因编辑系统、其构建方法及在高产虫草素工程菌株中的应用。本发明毕赤酵母CRISPR‑Cas9基因编辑系统的构建主要包括组氨酸HIS4营养缺陷回补实现KhCas9的无抗组装；sgRNA‑tRNA阵列和IIS型限制性内切酶组合简化基因编辑操作实现多基因同时高效编辑；Brex27结构域与KhCas9融合强化同源重组效率。利用该基因编辑系统，通过优化甲醇同化、3’‑AMP和腺苷前体供应、ATPNADPH能量供应等，首次实现无抗性基因残留的虫草素工程菌株的构建，使毕赤酵母的基因编辑效率大幅提升，为虫草素的工业化生产提供有力工具。

本发明授权一种毕赤酵母高效基因编辑系统、其构建方法及在高产虫草素工程菌株中的应用在权利要求书中公布了：1.KhCas9-Brex27表达盒，其特征在于，所述表达盒包括顺次连接的如下元件：PpHIS4-1片段-GAP启动子-Kozak序列-hCas9蛋白-Linker-Brex27基序-SV40核定位信号-AOX1终止子-DAS1终止子-PpHIS4-2片段； 其中，PpHIS4-1片段、PpHIS4-2片段来自质粒pAO815；用于扩增PpHIS4-1片段的引物为F-PpHIS4-1和R-PpHIS4-1，用于扩增PpHIS4-2片段的引物为F-PpHIS4-2和R-PpHIS4-2； 引物序列如下5'-3'： F-PpHIS4-1：ATGACATTTCCCTTGCTACCTGCAT R-PpHIS4-1：CTTGTGAGGAGGCCTTAGAAACGTC F-PpHIS4-2：AAATTGAAGATGCCCTTCGTCGTCCT R-PpHIS4-2：TTAAATAAGTCCCAGTTTCTCCATACGAACC Brex27基序来自人类，氨基酸序列为ALDFLSRLPLPPPVSPICTFVSPAAQKAFQPPRSCG； hCas9蛋白来自化脓链球菌Streptococcuspyogenes，在NCBI中的参考序列编号为69900935； GAP启动子、AOX1终止子和DAS1终止子均来自毕赤酵母PichiapastorisGS115； Linker的氨基酸序列为GGGGS3； 经毕赤酵母密码子优化后的KhCas9-Brex27表达盒的序列如SEQIDNO:10所示。

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