南方医科大学南方医院洪睦铿获国家专利权
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龙图腾网获悉南方医科大学南方医院申请的专利一种高效表达β-葡萄糖苷酶的基因工程菌及其应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN118910111B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-10-14发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202410979138.4,技术领域涉及:C12N15/70;该发明授权一种高效表达β-葡萄糖苷酶的基因工程菌及其应用是由洪睦铿;李娟;马佛培;韩冰琪;叶海欣;王星;张芳玲设计研发完成,并于2024-07-22向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种高效表达β-葡萄糖苷酶的基因工程菌及其应用在说明书摘要公布了:本发明公开了一种高效表达β‑葡萄糖苷酶的基因工程菌及其应用,涉及生物工程技术领域。本发明基于CRISPRCas9介导的基因编辑技术,通过引物设计合成了pTargetF‑bGC质粒,通过pTargetF‑bGC质粒将β‑葡萄糖苷酶基因整合入E.coliNissle1917的基因组,构建一种全新的基因工程菌,该工程菌实现了β‑葡萄糖苷酶的高效表达,将该基因工程菌应用于类风湿关节炎的治疗中,能够提高活性分子的生物利用度、降低治疗成本、减少药物副作用,为类风湿关节炎的治疗提供一种新的途径,具有很好的应用前景。
本发明授权一种高效表达β-葡萄糖苷酶的基因工程菌及其应用在权利要求书中公布了:1.一种表达β-葡萄糖苷酶的基因工程菌的构建方法,其特征在于,包括以下步骤: 1设计引物扩增β-葡萄糖苷酶基因;β-葡萄糖苷酶基因从狄氏副拟杆菌ATCC8503中克隆得到;用于扩增β-葡萄糖苷酶基因的引物的核苷酸序列如SEQIDNO:1和SEQIDNO:2所示; 2分别设计引物从大肠杆菌基因组克隆启动子nirB基因、attλ位点的上游同源臂和下游同源臂;用于克隆启动子nirB基因的引物的核苷酸序列如SEQIDNO:3和SEQIDNO:4所示;用于克隆attλ位点上游同源臂的核苷酸序列如SEQIDNO:5和SEQIDNO:6所示;用于克隆attλ位点下游同源臂的核苷酸序列如SEQIDNO:7和SEQIDNO:8所示; 3设计引物从pTargetF质粒克隆gRNA序列;用于克隆gRNA序列的引物的核苷酸序列如SEQIDNO:9和SEQIDNO:10所示; 4使用引物对pTargetF质粒进行线性化;用于线性化pTargetF质粒的引物的核苷酸序列如SEQIDNO:11和SEQIDNO:12所示; 5将所述gRNA、attλ位点上游同源臂、启动子nirB基因、β-葡萄糖苷酶基因和attλ位点下游同源臂通过同源重组依次构建到所述线性化的pTargetF质粒骨架,得重组质粒pTargetF-bGC; 6将pCas质粒转入大肠杆菌感受态细胞,得成功整合pCas质粒的感受态细胞;再将重组质粒pTargetF-bGC转入成功整合pCas质粒的感受态细胞,得所述表达β-葡萄糖苷酶的基因工程菌,大肠杆菌为E.coliNissle1917。
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