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龙图腾网获悉重庆医科大学申请的专利一种基于ARIH1质谱鉴定CRL复合物的PROTAC研发方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN119959552B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-10-14发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202510158221.X，技术领域涉及：G01N33/68；该发明授权一种基于ARIH1质谱鉴定CRL复合物的PROTAC研发方法是由谢国姣;谌錾设计研发完成，并于2025-02-13向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种基于ARIH1质谱鉴定CRL复合物的PROTAC研发方法在说明书摘要公布了：本发明公开了一种基于ARIH1质谱鉴定CRL复合物的PROTAC研发方法，涉及生物技术领域；包括如下步骤：S1：构建PBTE‑C357SARIH1过表达的H9细胞系；S2：诱导H9干细胞系由ESC向中胚层、内胚层分化；S3：过表达ARIH1免疫沉淀实验；S31：将H9细胞分别接种于12个15cm细胞皿中，各加入20mLRPMI培养基，并同时加入Doxycycline诱导FLAG‑ARIH1过表达，过表达后准备收样。本发明基于ARIH1作为CO‑E3连接酶与发生拟素化激活的CRL形成稳定复合物的特性，利用TMT‑IPMS技术精准鉴定处于激活状态的CRL底物受体。

本发明授权一种基于ARIH1质谱鉴定CRL复合物的PROTAC研发方法在权利要求书中公布了：1.一种基于ARIH1质谱鉴定CRL复合物的PROTAC研发方法，其特征在于，包括如下步骤： S1：构建PBTE-C357SARIH1过表达的H9细胞系； S2：诱导H9干细胞系由ESC向中胚层和内胚层分化； S3：过表达ARIH1免疫沉淀实验； S31：将H9细胞分别接种于12个15cm细胞皿中，加入20mLRPMI培养基，并同时加入Doxycycline诱导FLAG-ARIH1过表达，过表达后准备收样，在收样当日在对照组加入MLN处理； S32：使用含有蛋白酶抑制剂的MCLBbuffer裂解细胞，在裂解开始前，将蛋白酶抑制剂补充至裂解缓冲液，并将含有蛋白酶抑制剂的裂解液放在冰上，每个皿加入裂解液，刮取细胞并收集到管中，在摇床下旋转处理，然后使用低温离心机离心； S33：将两个管的上清液合并为一个样品，并使用滤器过滤，然后过滤到含有FLAGBeads的管中，并在摇床上旋转处理； S34：将样品与FLAGBeads混合液转移到管中，用MCLBbuffer洗涤，使用3×FLAG肽洗脱，将洗脱液合并至一个EP管内； S35：对样品加入TCEP，还原1小时，之后使用碘乙酰胺对样品进行烷基化；使用TCA乙腈沉淀，然后在buffer中重悬，往重悬液中加入LysC，室温过夜； S36：次日加入胰蛋白酶，消化6小时，再加入乙腈ACN混合，室温反应；加入TMT，再次进行室温反应； S37：对分化至中胚层和内胚层的细胞采用相同的方式进行处理，之后从每个样品中取2µL，合并到100µL5%FA5%ACN中，进行Stagetip处理，干燥后进行质谱分析。

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