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龙图腾网获悉深圳市易佰奥生物科技有限公司申请的专利大规模工业化多细胞动物发酵培养方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN117016490B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-10-17发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202211398743.X，技术领域涉及：A01K67/30；该发明授权大规模工业化多细胞动物发酵培养方法是由龚芳;刘慧设计研发完成，并于2022-11-09向国家知识产权局提交的专利申请。

本大规模工业化多细胞动物发酵培养方法在说明书摘要公布了：大规模多细胞动物发酵培养方法，为克服目前线虫的培养方法都无法实现作为一个工业化生产发酵产物的方式，本发明提供一种大规模工业化多细胞动物发酵培养方法，通过稳定控制发酵罐内的温度，调节温度至线虫生长最适温度20~25℃，建立了适合线虫生长的发酵体系，从技术上突破了工业化大规模发酵培养多细胞动物线虫的工艺，打破了实验室固体培养基和小体积液体培养的瓶颈。本发明的有益效果在于可一次性获得大量线虫个体，大概有1012个个体，此技术可以满足将线虫发展为蛋白表达和纯化的真核体系载体，将过去的低等单细胞工具载体体系上升到活体真核高等多细胞动物体系，生产出具有生物学活性的发酵产物，特别是有功能活性且容易维持活性的蛋白质与蛋白质复合物。

本发明授权大规模工业化多细胞动物发酵培养方法在权利要求书中公布了：1.一种大规模工业化多细胞动物发酵培养方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤： 1校准发酵罐的pH电极和溶氧电极，准备线虫液体培养基S-Medium所需的原料：NaCl0.5％～0.6％、EDTA0.15％～0.2％、K2PO40.55％～0.65％、KH2PO40.8％～0.12％、0.22‰～0.28‰胆固醇、0.14～0.15‰CaCl2、0.12～0.14％MgSO4、0.65～0.7％FeSO4·7H2O、0.18～0.22‰MnCl2·4H2O、0.25～0.3‰ZnSO4·7H2O、0.022～0.028‰CuSO4·5H2O； 2称取NaCl、EDTA、K2PO4和KH2PO4于发酵罐中，加水，再加入总重量0.1～1％的消泡剂，于发酵罐中灭菌； 3当罐内温度降至低于50℃后，将罐内压力降至0～0.05MPa，慢慢拧松接种口，在接种口附近塞上沾有酒精的棉花，拧开接种口的瞬间点燃火焰，加入已除菌的CaCl2和MgSO4，再加入已过滤除菌的金属母液FeSO4·7H2O、MnCl2·4H2O、ZnSO4·7H2O、CuSO4·5H2O，熄灭火圈，加入胆固醇； 4接种时罐内压力为0，趁机接入酸碱泵，连接配制好的1～10MNaOH和1～10MHCl； 5拧紧接种口旋钮，利用放空阀恢复罐内压力至0.05～0.1MPa； 6控制pH范围为6.5～7.6，溶氧量为30％～70％； 7降温将罐内液体温度降至20～25℃，开启搅拌，将罐内液体混匀； 8裂解锥形瓶中养至成虫第1～2天阶段的线虫，获得卵，用无菌的M9buffer清洗数次； 9接种线虫至发酵罐：使用放空阀将罐内压力降至0～0.05MPa，在接种口附近塞上沾有酒精的棉花，拧开接种口的瞬间点燃火焰，倒入线虫卵，拧紧接种口旋钮，利用放空阀恢复罐内压力至0.05～0.1MPa； 10线虫在发酵罐内孵化后，加入线虫食物，用无菌的M9buffer重悬获得的菌体，从接种口接入罐内，操作同步骤9的无菌控制； 11日常检查：控制线虫生长温度为20～25℃，pH为6.5～7.6，搅拌转速为100～160rpm； 12第二代线虫长至成虫阶段即可收样。

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