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龙图腾网获悉南京启真基因工程有限公司申请的专利用于构建三基因联合突变的小型猪核移植供体细胞的基因编辑系统及其应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN115232817B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-10-21发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202111019980.6，技术领域涉及：C12N15/113；该发明授权用于构建三基因联合突变的小型猪核移植供体细胞的基因编辑系统及其应用是由牛冬;汪滔;刘璐;马翔;段星;曾为俊;王磊;程锐;赵泽英;陶裴裴;黄彩云设计研发完成，并于2021-09-01向国家知识产权局提交的专利申请。

本用于构建三基因联合突变的小型猪核移植供体细胞的基因编辑系统及其应用在说明书摘要公布了：本发明公开了用于构建三基因GHR基因、IGF1基因和IGF2基因联合突变的小型猪核移植供体细胞的基因编辑系统及其应用。本发明提供了一种试剂盒，包括SEQIDNO：36所示GHR‑E5‑gRNA2、SEQIDNO：37所示GHR‑E5‑gRNA3、SEQIDNO：38所示IGF1‑E4‑gRNA1、SEQIDNO：39所示IGF1‑E4‑gRNA2、SEQIDNO：40所示IGF2‑E4‑gRNA2、SEQIDNO：41所示IGF2‑E4‑gRNA7和NCN蛋白。NCN蛋白为Cas9蛋白或具有Cas9蛋白的融合蛋白。本发明采用CRISPRCas9技术联合双gRNA编辑进行了GHR基因、IGF1基因和IGF2基因的联合敲除，并获得了三个基因联合敲除的单细胞克隆，为后期通过体细胞核移植动物克隆技术培育小型猪及生长发育障碍或迟缓模型猪奠定了基础。

本发明授权用于构建三基因联合突变的小型猪核移植供体细胞的基因编辑系统及其应用在权利要求书中公布了：1.一种试剂盒，包括GHR-E5-gRNA2、GHR-E5-gRNA3、IGF1-E4-gRNA1、IGF1-E4-gRNA2、IGF2-E4-gRNA2、IGF2-E4-gRNA7和NCN蛋白； 所述GHR-E5-gRNA2为sgRNA，其靶序列结合区如SEQIDNO：36中第3-22位核苷酸所示；所述GHR-E5-gRNA3为sgRNA，其靶序列结合区如SEQIDNO：37中第3-22位核苷酸所示；所述IGF1-E4-gRNA1为sgRNA，其靶序列结合区如SEQIDNO：38中第3-22位核苷酸所示；所述IGF1-E4-gRNA2为sgRNA，其靶序列结合区如SEQIDNO：39中第3-22位核苷酸所示；所述IGF2-E4-gRNA2为sgRNA，其靶序列结合区如SEQIDNO：40中第3-22位核苷酸所示；所述IGF2-E4-gRNA7为sgRNA，其靶序列结合区如SEQIDNO：41中第3-22位核苷酸所示；所述NCN蛋白如SEQIDNO：3所示； 所述NCN蛋白的制备方法包括如下步骤： 1将质粒pKG-GE4导入大肠杆菌BL21DE3，得到重组菌； 2采用液体培养基30℃培养所述重组菌，然后加入IPTG并25℃诱导培养，然后收集菌体； 3将收集的菌体进行菌体破碎，收集粗蛋白溶液； 4采用亲和层析从所述粗蛋白溶液中纯化具有His6标签的融合蛋白； 5采用具有His6标签的肠激酶酶切具有His6标签的融合蛋白，然后采用Ni-NTA树脂去除具有His6标签的蛋白，得到纯化的NCN蛋白； 所述质粒pKG-GE4如SEQIDNO：1所示； 所述试剂盒的用途为如下a或b或c或d或e或f或g：a制备重组猪成纤维细胞；b制备小型猪；c培育体型变小的猪；d制备生长发育迟缓的模型猪；e制备生长发育迟缓的细胞模型或生长发育迟缓的组织模型或生长发育迟缓的器官模型；f制备生长发育障碍的模型猪；g制备生长发育障碍的细胞模型或生长发育障碍的组织模型或生长发育障碍的器官模型。

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