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龙图腾网获悉南京启真基因工程有限公司申请的专利构建DOK7基因突变的先天性肌无力模型猪核移植供体细胞的基因编辑系统及其应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN115232818B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-10-21发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202111097048.5，技术领域涉及：C12N15/113；该发明授权构建DOK7基因突变的先天性肌无力模型猪核移植供体细胞的基因编辑系统及其应用是由牛冬;汪滔;王磊;刘文娇;陶裴裴;曾为俊;程锐;赵泽英;马翔;刘璐;牛一帆;黄彩云;段星设计研发完成，并于2021-09-18向国家知识产权局提交的专利申请。

本构建DOK7基因突变的先天性肌无力模型猪核移植供体细胞的基因编辑系统及其应用在说明书摘要公布了：本发明公开了构建DOK7基因突变的肌无力疾病模型猪核移植供体细胞的基因编辑系统及其应用。本发明提供了SEQIDNO：16所示DOK7‑gRNA2、SEQIDNO：17所示DOK7‑gRNA4和NCN蛋白在制备试剂盒中的应用。本发明还提供了一种制备重组细胞的方法，包括如下步骤：将DOK7‑gRNA2、DOK7‑gRNA4和NCN蛋白共转染猪细胞，得到重组细胞。所述重组细胞为DOK7基因发生突变的重组细胞。以上任一所述试剂盒的用途为：制备重组细胞；制备肌无力模型猪；制备肌无力细胞模型或肌无力组织模型或肌无力器官模型。本发明对于肌无力疾病药物的研发及揭示该病的发病机制具有重大应用价值。

本发明授权构建DOK7基因突变的先天性肌无力模型猪核移植供体细胞的基因编辑系统及其应用在权利要求书中公布了：1.DOK7-gRNA2、DOK7-gRNA4和NCN蛋白在制备试剂盒中的应用； 所述DOK7-gRNA2为sgRNA，其靶序列结合区如SEQIDNO：16中第3-22位核苷酸所示；所述DOK7-gRNA4为sgRNA，其靶序列结合区如SEQIDNO：17中第3-22位核苷酸所示；所述NCN蛋白如SEQIDNO：3所示； 所述NCN蛋白的制备方法包括如下步骤： 1将质粒pKG-GE4导入大肠杆菌BL21DE3，得到重组菌； 2采用液体培养基30℃培养所述重组菌，然后加入IPTG并25℃诱导培养，然后收集菌体； 3将收集的菌体进行菌体破碎，收集粗蛋白溶液； 4采用亲和层析从所述粗蛋白溶液中纯化具有His6标签的融合蛋白； 5采用具有His6标签的肠激酶酶切具有His6标签的融合蛋白，然后采用Ni-NTA树脂去除具有His6标签的蛋白，得到纯化的NCN蛋白； 所述质粒pKG-GE4如SEQIDNO：1所示； 所述试剂盒的用途为如下a或b或c：a制备重组细胞；b制备肌无力模型猪；c制备肌无力细胞模型或肌无力组织模型或肌无力器官模型。

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