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龙图腾网获悉山东第一医科大学(山东省医学科学院)申请的专利一种成球/贴壁交替培养诱导Muse细胞分化为胰岛β细胞球的方法及应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN120330130B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-10-24发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202510827702.5，技术领域涉及：C12N5/071；该发明授权一种成球/贴壁交替培养诱导Muse细胞分化为胰岛β细胞球的方法及应用是由王芝辉;鲁哲;任世凤;王冰洁设计研发完成，并于2025-06-20向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种成球/贴壁交替培养诱导Muse细胞分化为胰岛β细胞球的方法及应用在说明书摘要公布了：本发明涉及细胞工程技术领域，具体涉及一种成球贴壁交替培养诱导Muse细胞分化为胰岛β细胞球的方法及应用。本发明中实验结果表明，静态成球培养的Muse细胞因球体内部缺氧导致细胞凋亡明显，培养23天后，细胞几乎全部凋亡；直接贴壁诱导培养的Muse细胞增殖能力较强，分化效率为37.7%；而采用成球和贴壁交替培养诱导的方式，不仅仅能实现稳定传代，而且分化效率为62.4%；交替培养诱导方法有效解决了增殖和分化效率的问题，实现了胰岛β细胞的稳定传代和诱导分化。

本发明授权一种成球/贴壁交替培养诱导Muse细胞分化为胰岛β细胞球的方法及应用在权利要求书中公布了：1.一种成球贴壁交替培养诱导Muse细胞分化为胰岛β细胞球的方法，其特征在于，包括以下步骤： 1制备获取Muse细胞； 2使用S1培养基培养所得Muse细胞，使其定向分化为定型内胚层细胞； 3使用S2培养基培养所得定型内胚层细胞，诱导其分化获得胰腺前体细胞； 4使用S3培养基培养所得胰腺前体细胞，诱导其分化获得胰腺内分泌祖细胞； 5使用S4培养基培养所得胰腺内分泌祖细胞，诱导其分化获得胰腺内分泌细胞球； 6使用S5培养基培养所得胰腺内分泌细胞球，诱导其分化获得胰岛β细胞球； 步骤2~步骤6细胞培养过程中，均是采用成球贴壁交替培养的方式； S1培养基以DMEM细胞培养基为基础培养基，加入重组人激活素-A、糖原合成酶激酶-3β选择性抑制剂CHIR-99021以及内胚层诱导剂1； S2培养基以DMEM细胞培养基为基础培养基，加入重组人角质细胞生长因子1成纤维细胞生长因子7‌； S3培养基以DMEM细胞培养基为基础培养基，加入重组人角质细胞生长因子1成纤维细胞生长因子7、视黄酸、SonicHedgehog信号通路抑制剂SANT-1、ROCK信号通路抑制剂Y-27632、选择性BMPI型受体抑制剂LDN193189、PKC激活剂PDBu以及重组人激活素-A； S4培养基以DMEM细胞培养基为基础培养基，加入肝素钠、ALK5抑制剂A83-01、TGF-β受体激酶抑制剂SB-431542、Betacellulin蛋白、三碘甲状腺原氨酸T3、视黄酸和SonicHedgehog信号通路抑制剂SANT-1； S5培养基以DMEM和DMEMF12混合后的培养基为基体，加入ZnSO4、ALK5抑制剂A83-01、三碘甲状腺原氨酸T3以及胰高血糖素样肽-1； 步骤2中，使用S1培养基培养所得Muse细胞，使其定向分化为定型内胚层细胞的方法具体包括：于37℃、5%CO2条件下，在悬浮条件下成球培养48h，后直接贴壁培养24h； 步骤3中，使用S2培养基培养所得定型内胚层细胞，诱导其分化获得胰腺前体细胞的方法具体包括：于37℃、5%CO2条件下，在悬浮条件下成球培养48h，后直接贴壁培养24h； 步骤4中，使用S3培养基培养所得胰腺前体细胞，诱导其分化获得胰腺内分泌祖细胞的方法具体包括：于37℃、5%CO2条件下，在悬浮条件下成球培养48h，后直接贴壁培养24h； 步骤5中，使用S4培养基培养所得胰腺内分泌祖细胞，诱导其分化获得胰腺内分泌细胞球的方法包括：于37℃、5%CO2条件下，共诱导培养7天，每三天为一组，每组中先在悬浮条件下成球培养48h，后直接贴壁培养24h；第7天在悬浮条件下成球培养24h； 步骤6中，使用S5培养基培养所得胰腺内分泌细胞球，诱导其分化获得胰岛β细胞球的方法包括：于37℃、5%CO2条件下，共诱导培养7天，每三天为一组，每组中先在悬浮条件下成球培养48h，后直接贴壁培养24h；第7天在悬浮条件下成球培养24h； 步骤1中，所述Muse细胞来源于脐带； 步骤2中，S1培养基中，重组人激活素-A的浓度为95~105ngmL；糖原合成酶激酶-3β选择性抑制剂CHIR-99021的浓度为2.8~3.2μM；内胚层诱导剂1浓度为1.8~2.2mM。

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