厦门鲎试剂生物科技股份有限公司吴海苹获国家专利权
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龙图腾网获悉厦门鲎试剂生物科技股份有限公司申请的专利一种重组鲎三因子组合物及其检测内毒素的方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN114196657B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-10-28发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202111511625.0,技术领域涉及:C12N9/64;该发明授权一种重组鲎三因子组合物及其检测内毒素的方法是由吴海苹;罗贵峰;吴尚毅;吴冠辰设计研发完成,并于2021-12-06向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种重组鲎三因子组合物及其检测内毒素的方法在说明书摘要公布了:本发明提供了一种重组鲎三因子组合物及其应用,该组合物包括重组鲎C因子、重组鲎B因子和重组鲎凝固酶原因子;所述重组鲎C因子、重组鲎B因子和重组鲎凝固酶原因子均由哺乳动物细胞HEK293表达。由此通过哺乳类细胞HEK293表达C因子、B因子和PCE因子,三种因子同时表达增强C因子活性,提高灵敏度,并且表达后的因子是可分泌和具有较高活性的。
本发明授权一种重组鲎三因子组合物及其检测内毒素的方法在权利要求书中公布了:1.一种重组鲎三因子组合物,其特征在于,包括重组鲎C因子、重组鲎B因子和重组鲎凝固酶原因子; 所述重组鲎C因子、重组鲎B因子和重组鲎凝固酶原因子均由哺乳动物细胞HEK293表达; 所述重组鲎C因子、重组鲎B因子和重组鲎凝固酶原因子的制备包括如下步骤: 1以SEQIDNO:4所示的基因为模板,SEQIDNO:8、SEQIDNO:9为引物对C因子进行PCR扩增,获得FactorC-his6-ApaI;以SEQIDNO:5所示的基因为模板,SEQIDNO:10、SEQIDNO:11为引物对B因子进行PCR扩增,获得FactorB-his6-ApaI;以SEQIDNO:6所示的基因为模板,SEQIDNO:12、SEQIDNO:13为引物对重组鲎凝固酶原因子进行PCR扩增,获得PCE-his6-ApaI;以SEQIDNO:7所示的基因为模板,SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:16、SEQIDNO:17为引物对gp67进行PCR扩增,获得KpnI-gp67-1、KpnI-gp67-2和KpnI-gp67-3; 2将KpnI-gp67-1基因片段与FactorC-his6-ApaI基因片段连接,获得KpnI-gp67-FactorC-his6-ApaI;将KpnI-gp67-2基因片段与FactorB-his6-ApaI基因片段连接,获得KpnI-gp67-FactorB-his6-ApaI;将KpnI-gp67-3基因片段与PCE-his6-ApaI基因片段连接,获得KpnI-gp67-PCE-his6-ApaI; 3将KpnI-gp67-FactorC-his6-ApaI基因片段、KpnI-gp67-FactorB-his6-ApaI基因片段和KpnI-gp67-PCE-his6-ApaI基因片段分别与pcDNA载体连接,获得重组质粒pcDNA-gp67-factorC、pcDNA-gp67-factorB和pcDNA-gp67-PCE,重组质粒再转染哺乳动物细胞HEK293,培养表达纯化蛋白,获得重组鲎C因子、重组鲎B因子和重组鲎凝固酶原因子。
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