苏州大学傅煜轩获国家专利权
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龙图腾网获悉苏州大学申请的专利荧光蛋白mKate2特异性标记的细胞外囊泡及其构建方法及应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN115975945B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-10-28发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202211310329.9,技术领域涉及:C12N5/10;该发明授权荧光蛋白mKate2特异性标记的细胞外囊泡及其构建方法及应用是由傅煜轩;熊思东;张瑞设计研发完成,并于2022-10-25向国家知识产权局提交的专利申请。
本荧光蛋白mKate2特异性标记的细胞外囊泡及其构建方法及应用在说明书摘要公布了:本发明公开了一种荧光蛋白mKate2特异性标记的细胞外囊泡及其构建方法及应用,本发明设计mKate2‑VSVG融合基因,即将水泡性口炎病毒糖蛋白GVSVG基因的胞外区域替换为mKate2基因,保留VSVG基因的跨膜区域和胞内区域,将mKate2红色荧光蛋白特异性地表达于EVs中,借助mKate2远红外荧光蛋白在体内体外示踪的优越性,能够在体内和体外,特别是活体成像中更好更准确的追踪并研究EVs的功能,如EVs在小鼠各个组织器官中的分布,代谢过程以及EVs的特异性靶向能力。
本发明授权荧光蛋白mKate2特异性标记的细胞外囊泡及其构建方法及应用在权利要求书中公布了:1.一种荧光蛋白mKate2特异性标记的细胞外囊泡的构建方法,其特征在于,包括如下步骤: S1、扩增获得mKate2基因片段; S2、体外合成VSVG的跨膜区域及胞内区域全长基因片段; S3、将S1步骤的mKate2基因片段和S2步骤的VSVG的跨膜区域及胞内区域全长基因片段进行连接,并连接到载体上得到重组表达载体; S4、将重组表达载体转入宿主细胞中,培养后收集细胞培养上清,将细胞培养上清在8000-15000g离心20-40min取上清液,将上清液经过微米膜过滤后在80000-120000g超速离心80-100min,取沉淀,将沉淀采用缓冲溶液重悬,再在80000-120000g超速离心80-100min,去除上清,得到所述的细胞外囊泡; 其中,所述细胞外囊泡上表达mKate2-VSVG融合蛋白,所述的mKate2-VSVG融合蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示,所述的mKate2-VSVG融合蛋白的前端设有信号肽,所述的宿主细胞为293T细胞。
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