成都协和生物技术有限责任公司;中国医学科学院输血研究所杜晞获国家专利权
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龙图腾网获悉成都协和生物技术有限责任公司;中国医学科学院输血研究所申请的专利一种活化凝血酶原复合物aPCC及其制备方法与应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN118460516B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-10-28发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202410668142.9,技术领域涉及:C12N9/64;该发明授权一种活化凝血酶原复合物aPCC及其制备方法与应用是由杜晞;马莉;王宗奎;李长清;杨显福;瞿付娟;范丽;蒋鹏;叶生亮;付萍;黄雨薇设计研发完成,并于2024-05-28向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种活化凝血酶原复合物aPCC及其制备方法与应用在说明书摘要公布了:本发明提供了一种活化凝血酶原复合物aPCC及其制备方法与应用,属于止血药物制备技术领域。本发明通过DEAE‑SephadexA‑50凝胶对去冷沉淀血浆进行粗提、SD病毒灭活、DEAE‑SephadexA‑50凝胶再次纯化,并在粗提后或再次纯化后进行激活,制备活化凝血酶原复合物aPCC。本发明制备的活化凝血酶原复合物aPCC有较高FEIBA活性,均在25IUmL以上,最高达到了101.64,止血效果好;又有较低的FIIa活性,均在2IUmL以下,患者使用后发生血栓风险显著降低。
本发明授权一种活化凝血酶原复合物aPCC及其制备方法与应用在权利要求书中公布了:1.一种活化凝血酶原复合物aPCC的制备方法,其特征在于,包括如下步骤: 1去冷沉淀血浆调整蛋白浓度和PH后,经过DEAE-SephadexA-50凝胶进行吸附、洗涤、洗脱,获得PCC粗提液; 2PCC粗提液依次经处理和激活后得到PCC激活物; 3PCC激活物超滤透析、浓缩,得到活化凝血酶原复合物aPCC; 步骤1中,所述调整蛋白浓度为:将去冷沉淀血浆用生理盐水和醋酸钠缓冲液调整其蛋白浓度至3%-5%,所述PH为6.8-7.2;所述DEAE-SephadexA-50凝胶吸附所用的平衡液含0.012molL柠檬酸钠和0.1molLNaCl,PH6.8-7.2;所述洗涤使用的洗涤液含0.02molL柠檬酸钠和0.15molLNaCl,PH为6.8-7.2;所述洗脱使用的洗脱液含0.01molL柠檬酸钠和2.4molLNaCl,PH为6.6-7.0; 步骤2中,所述处理为超滤透析、SD病毒灭活、再次纯化;所述激活的方法为:添加激活剂激活,激活完成后EDTA钠终止激活; 步骤2中,所述超滤透析至电导率低于14mscm;所述SD病毒灭活的方法为:加入SD灭活剂,使其最终浓度分别为0.1%Tween80、0.3%磷酸三丁酯,在24℃下恒温6-8h进行SD病毒灭活; 步骤2中,所述再次纯化是使用DEAE-SephadexA-50凝胶进行吸附、洗涤、洗脱,纯化的条件为所述DEAE-SephadexA-50凝胶吸附所用的平衡液含0.02molL柠檬酸钠和0.1molLNaCl,PH为6.8-7.2;所述洗涤使用的洗涤液含0.02molL柠檬酸钠和0.16molLNaCl,PH为6.8-7.2;所述洗脱使用的洗脱液含0.01molL柠檬酸钠和2.4molLNaCl,PH为6.6-7.0; 步骤2中,所述激活剂为CaCl2,所述激活剂的终浓度为5~10mM,激活的温度为12~25℃,激活的时间为8~32h。
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