天津大学柳鹏飞获国家专利权
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龙图腾网获悉天津大学申请的专利基于光片荧光显微镜的肺内脉管三维可视化方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN120084770B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-10-28发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202510257024.3,技术领域涉及:G01N21/64;该发明授权基于光片荧光显微镜的肺内脉管三维可视化方法是由柳鹏飞;郭伟;敖思雨;邸涵;李世博;陈林肯;王梓桐;李渊;金鹏设计研发完成,并于2025-03-05向国家知识产权局提交的专利申请。
本基于光片荧光显微镜的肺内脉管三维可视化方法在说明书摘要公布了:本发明公开了基于光片荧光显微镜的肺内脉管三维可视化方法,属于三维成像技术领域,解决了现有影像学和超声检查设备空间分辨率低的问题,所述方法包括对小鼠进行气管插管给药,采用皮下注射cy7溶液进行染色,小鼠肺组织利用梯度浓度四氢呋喃溶液脱水、二氯甲烷脱脂使样本接近透明,采用光片荧光显微成像系统对肺组织进行三维成像拍摄;本发明通过红外二区波段的荧光激发和采集,可以对肺组织内部脉管系统更高的成像深度,并且在深处成像有着更好的轴向分辨率、信号背景比和对比度,可以将众多二维图像切片整合、重构,形成一个直观且完整的肺内脉管三维可视化模型。通过量化三维模型,从而可以更准确地观察到肺内脉管的微细结构变化。
本发明授权基于光片荧光显微镜的肺内脉管三维可视化方法在权利要求书中公布了:1.基于光片荧光显微镜的肺内脉管三维可视化方法,其特征在于,所述基于光片荧光显微镜的肺内脉管三维可视化方法包括: S10,选择健康的雄性小鼠,雄性小鼠为BALBc小鼠,年龄6周,体重25±1g; S20,使用7.5%的2-氯乙基乙基硫化物CEES对小鼠进行气管插管给药; S30,在给药18h后将小鼠麻醉,采用皮下注射1mgmL的cy7溶液进行染色,5min后小鼠心脏灌注PBS冲洗血液,随后将小鼠肺组织固定并保存在4%PFA中; S40,小鼠肺组织利用梯度浓度四氢呋喃溶液脱水、二氯甲烷脱脂使样本接近透明,并利用二苄醚匹配折射率; S50,取处理后的小鼠肺组织,采用光片荧光显微成像系统对肺组织进行三维成像拍摄,获取肺内脉管三维可视化模型; 所述采用光片荧光显微成像系统对肺组织进行三维成像拍摄流程的方法,具体包括: S501,启动飞秒脉冲激光器并设定其发射730nm波长的单光子激发光,采用750amp;800LP型滤波片替换光片显微镜前端的滤波片; S502,采用空间光调制器进行相位调制,加载相位信息,将光束转化为两种光束形态,其中,两种光束形态为高斯光束和艾里光束; S503,基于控制软件操控位移台,使成像组件中照明物镜和探测物镜平稳浸入与经过透明化处理的小鼠肺组织折射率相契合的介质之中,确保光束无损且高效地穿透小鼠肺组织; S504,将含有金团簇的琼脂糖溶液灌注于FEP管内,并将此FEP管放置于成像区域的预定位置,通过旋转探测物镜的螺旋测微头,并微调螺旋测微头位置,直至在相机的显示屏上呈现出清晰且完整的图像,完成对焦工序,对焦无误后,将待测小鼠肺组织安置于折射率匹配的介质中; S505,将照明光束由高斯光束转换为艾里光束,在精准框定成像区域后,随即启动图像stack堆栈的采集工作完成拍摄; S506,采用标定好的点扩散函数PSF对原始图像数据进行反卷积处理,恢复图像的轴向分辨率,得到反卷积处理后的图像数据; S507,将经过反卷积处理后的图像数据导入图像分析软件,形成直观且完整的三维模型,获取肺内脉管三维可视化模型。
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