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龙图腾网获悉西南医科大学申请的专利一种relA/spoT双基因缺失的肺炎克雷伯菌减毒活疫苗株及其制备方法与应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN120118816B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-10-28发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202510292919.0，技术领域涉及：C12N1/21；该发明授权一种relA/spoT双基因缺失的肺炎克雷伯菌减毒活疫苗株及其制备方法与应用是由周英顺;陈巧;黎莹;冷亚旭;周洁;付莉设计研发完成，并于2025-03-12向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种relA/spoT双基因缺失的肺炎克雷伯菌减毒活疫苗株及其制备方法与应用在说明书摘要公布了：本发明提供了一种relAspoT双基因缺失的肺炎克雷伯菌减毒活疫苗株及其制备方法与应用，通过精准调控代谢应激响应降低毒力风险，同时保留强免疫原性。该疫苗具有以下优势：安全性：双重基因缺失防止毒力恢复，适用于特殊人群；有效性：诱导长效体液免疫，攻毒保护率达90％；工艺优势：常温储运成本低，黏膜给药途径便捷。

本发明授权一种relA/spoT双基因缺失的肺炎克雷伯菌减毒活疫苗株及其制备方法与应用在权利要求书中公布了：1.一种relAspoT双基因缺失的肺炎克雷伯菌减毒活疫苗株，其特征在于，所述疫苗株的制备方法包括： 以肺炎克雷伯菌NTUH-K2044菌株DNA为模板，分别用relA-AB和relA-CD引物对扩增relA的上、下游同源臂片段，用spoT-AB和spoT-CD引物对扩增spoT的上、下游同源臂片段； 以relA-AD为引物对分别连接relA的上、下游同源臂片段，获得relA的同源臂融合片段；以spoT-AD为引物对分别连接spoT的上、下游同源臂片段，获得spoT的同源臂融合片段；将所述relA的同源臂融合片段和所述spoT的同源臂融合片段分别连接到pKO4-Km载体后，获得含同源臂的重组质粒pKO4-Km-ΔrelA和pKO4-Km-ΔspoT； 将所述重组质粒pKO4-Km-ΔrelA转入S17-1λpir感受态细胞，以鉴定正确的菌落作为供体菌，NTUH-K2044菌株作为受体菌进行接合试验，筛选以relA-AD为引物对具有小片段且以pKO4-Km-FR为引物对无条带的单菌落，获得ΔrelA菌株； 将所述重组质粒pKO4-Km-ΔspoT转入S17-1λpir感受态细胞，以鉴定正确的菌落作为供体菌，ΔrelA菌株作为受体菌进行接合试验，以spoT-AD为引物对、pKO4-Km-FR为引物对进行PCR鉴定筛选，获得relAspoT双基因缺失的肺炎克雷伯菌减毒活疫苗株，即ΔrelAΔspoT菌株； 其中，所述relA-AB引物对的核苷酸序列如SEQIDNO.1-2所示；所述relA-CD引物对的核苷酸序列如SEQIDNO.3-4所示，所述spoT-AB引物对的核苷酸序列如SEQIDNO.7-8所示；所述spoT-CD引物对的核苷酸序列如SEQIDNO.9-10所示，所述pKO4-Km-FR引物对的核苷酸序列如SEQIDNO.13-14所示。

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