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龙图腾网获悉安徽天寅生物技术有限公司申请的专利一种蔗糖磷酸化酶全细胞催化合成AA-2G的工艺方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN120138087B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-10-28发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202510275014.2，技术领域涉及：C12P19/60；该发明授权一种蔗糖磷酸化酶全细胞催化合成AA-2G的工艺方法是由孙媛媛;吴建宇;孙金钟;芦卫民设计研发完成，并于2025-03-10向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种蔗糖磷酸化酶全细胞催化合成AA-2G的工艺方法在说明书摘要公布了：本发明属于抗坏血酸衍生物制备技术领域，具体涉及一种蔗糖磷酸化酶全细胞催化合成AA‑2G的工艺方法。本发明对长双歧杆菌来源的蔗糖磷酸化酶进行定点突变有效地提高了蔗糖磷酸化酶的酶活，并且通过全细胞催化合成2‑O‑D‑吡喃葡糖基‑L‑抗坏血酸，得到高产量的AA‑2G。另外本发明中改性LB培养基以及处理剂的使用，均很好地提高了AA‑2G的产量，为AA‑2G的工业化生产提供了一定的基础。另外，本发明采用生物催化法合成AA‑2G，反应条件温和，不使用有毒有害的化学试剂，减少了对环境的污染，符合绿色化学的发展理念。

本发明授权一种蔗糖磷酸化酶全细胞催化合成AA-2G的工艺方法在权利要求书中公布了：1.一种蔗糖磷酸化酶全细胞催化合成AA-2G的工艺方法，其特征在于，包括如下步骤： S1、对长双歧杆菌来源的蔗糖磷酸化酶进行关键位点突变，然后通过PET-22b+表达载体将突变后的SPase基因转化至大肠杆菌BL21DE3中得到突变菌株； 具体为： 1以SEQIDNO:4所示的核苷酸序列为模板，以L341V-F和L341V-R为引物，进行PCR即得到SEQIDNO:3所示的突变体；所述突变体的氨基酸序列如SEQIDNO:1所示； 所述的L341V-F的序列如SEQIDNO:5所示，L341V-R的序列如SEQIDNO:6所示； 2将突变体基因与PET-22b+，分别用BamHI、EcolI双酶切，纯化后用T4DNA连接酶16℃过夜连接，然后进行测序； 3将连接产物转化至大肠杆菌BL21DE3中，涂布于含抗生素的LB平板，37℃培养12~16h得突变菌株； S2、将突变体菌株接种到含有卡那霉素的改性LB培养基中，在37℃、200rmin条件下培养至OD600=0.6~0.8，加入IPTG，在28℃条件下诱导培养14h，培养结束后离心，收集菌体，用含有8%甘油的磷酸盐缓冲液洗涤3次，菌体在-20℃条件下保存待用； 所述的改性LB培养基包括如下组分：蛋白胨10gL、酵母膏5gL、NaCl10gL、维生素C6~8μgL、维生素E6~8μgL、酪氨酸10~12ngL、L-精氨酸15~19ngL、硝酸镧2.3~2.6μgL、硝酸铈1.9~2.5μgL、丝素蛋白10~12μgL； S3、将60~80gL蔗糖、40~50gL抗坏血酸搅拌溶于磷酸盐缓冲液中，然后加入5~6mmolL的步骤S2所得的菌体，搅拌混匀后添加处理剂，再置于摇床中进行摇晃反应； 所述的磷酸盐缓冲液的浓度为10~20mmoL； 所述处理剂中各成分及对应重量百分比为：吐温800.1~1%、羟丙基-β-环糊精4~6%、1-乙基-3-甲基咪唑醋酸盐3~4%，余量为去离子水； S4、产物分离与纯化： 反应结束后离心，将上清液通过0.22μm微滤膜和10kDa超滤膜去除大分子杂质，然后采用强酸性阳离子交换树脂对超滤后的溶液进行初步分离，用0.1molL盐酸溶液洗脱，收集含有AA-2G的洗脱液，再对洗脱液进行浓缩，然后采用制备型高效液相色谱法进行精制纯化即可。

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