河池学院苏建欢获国家专利权
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龙图腾网获悉河池学院申请的专利一种检测家蚕微粒子病毒的方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN116499950B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-10-31发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202310213301.1,技术领域涉及:G01N15/10;该发明授权一种检测家蚕微粒子病毒的方法是由苏建欢;陆正杰;黄康东;陈梦吉;覃龙伟;陈振烽;韦庆进;张寿彬设计研发完成,并于2023-03-07向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种检测家蚕微粒子病毒的方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种检测家蚕微粒子病毒的方法,本发明涉及检测技术领域,通过控制变量法,将三个实验组进行实验,利用控制不同环境下的PH值和离子浓度,检测最终的微粒子虫的数量,验证不同PH值和离子浓度对实验准确性的影响,同时,样本经过提纯后,杂质含量明显降低,利用显微镜对微粒子虫的外观特征进行提取辨别,通过颜色标记,能够在短时间内对微粒子虫进行计数,效率较高。
本发明授权一种检测家蚕微粒子病毒的方法在权利要求书中公布了:1.一种检测家蚕微粒子病毒的方法,其特征在于,包括以下步骤: 步骤一:取三份同种家蚕蚕子,分别标记为A、B、C,将A、B、C三份样本同时置于恒温箱中,恒温箱温度为26摄氏度,孵化周期为20天,挑选破壳的幼虫,剔除未破壳的虫卵,分别标记为A1、A2和A3; 步骤二:取三份玻璃培养室,消毒灭菌后,将三份样本置于密封有氧环境,持续投喂桑叶; 步骤三:在结茧前一周半,将病毒孢子以105个的剂量添食在桑叶上,给予A1样本食用;将病毒孢子以103个的剂量添食在桑叶上;给予A2样本食用,将病毒孢子以0个的剂量添食在桑叶上,给予A3样本食用; 步骤四:将三个样本持续养殖至结茧,随后进行微粒子的纯化; 步骤五:微孢子虫激活发芽,进行荧光显影标记; 步骤六:电子显微镜进行图像观察,计算微孢子病毒的数量; 所述步骤四中,微粒子的纯化方法为: 步骤a:将A1、A2和A3三份样本蚕蛹用75%乙醇对其表面进行消毒处理,并在研钵中充分研磨,收集研磨液于10mL离心管; 步骤b:将研磨液稀释之后,设置离心机500rmin,离心5min,收集上清; 步骤c:用四层纱布将上清过滤后收集滤液,且将滤液离心3000rmin,离心5min,留沉淀,弃上清; 步骤d:用灭菌双氧水将沉淀重悬; 步骤e:将灭菌脱脂棉用水浸泡后压实在10mL注射器内,再将孢子悬液用此注射器过滤,离心3000rmin,离心5min后,弃上清,重复步骤d和e三次; 步骤f:加入适当双氧水重悬沉淀,即为纯化的孢子悬液; 所述步骤五中,微孢子虫的激活和发芽是侵染宿主过程的重要环节,浸染宿主时,纯化后的孢子极丝弹出,宿主细胞感染,激活所需的条件主要包括环境pH值,Ca2+浓度,孢内渗透压这几个重要的方面; 微孢子虫的激活需要特异的pH值9.0-11.0环境,寄生于鳞翅目昆虫体内的微孢子虫需经一定pH值9.0-11.0的离子缓冲液处理才能发芽。
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