四川大学华西医院崔靖宇获国家专利权
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龙图腾网获悉四川大学华西医院申请的专利一种具有屏障功能的三维体外血脑屏障模型构建方法及其应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN120555328B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-10-31发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202511052924.0,技术领域涉及:C12N5/071;该发明授权一种具有屏障功能的三维体外血脑屏障模型构建方法及其应用是由崔靖宇;姜帅;尚文祚;严玉颖;吴波设计研发完成,并于2025-07-30向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种具有屏障功能的三维体外血脑屏障模型构建方法及其应用在说明书摘要公布了:本发明公开了一种具有屏障功能的三维体外血脑屏障模型构建方法及其应用,属于生物医学领域,所述方法包括:以甲基丙烯酰化明胶为主骨架制备光控生物功能化水凝胶,使用星形胶质细胞和神经元细胞制备神经血管基质成分悬液;将光控生物功能化水凝胶和神经血管基质成分悬液均匀混合得到均质的细胞‑水凝胶复合液,并制备为三维水凝胶微球;将三维水凝胶微球转移到Transwell培养皿嵌件的底部,形成一层稳定的神经侧基质,将脑微血管内皮细胞悬液加入到Transwell培养皿的下室中。本发明实现了多种生物活性物质的协同作用,克服了现有技术中生物活性物质负载方式单一的缺点。
本发明授权一种具有屏障功能的三维体外血脑屏障模型构建方法及其应用在权利要求书中公布了:1.一种具有屏障功能的三维体外血脑屏障模型构建方法,其特征在于,所述三维体外血脑屏障模型构建方法包括, S100、以甲基丙烯酰化明胶为主骨架制备光控生物功能化水凝胶, 所述光控生物功能化水凝胶中负载有功能性生物活性肽溶液; S200、使用星形胶质细胞和神经元细胞制备神经血管基质成分悬液; S300、将光控生物功能化水凝胶和神经血管基质成分悬液均匀混合得到均质的细胞-水凝胶复合液, 将所述细胞-水凝胶复合液注入微流控芯片的通道,同时在交叉的通道中引入油相,使得细胞-水凝胶复合液在油相中形成液滴,使用紫外或蓝光照射液滴,形成尺寸均匀的球形的三维水凝胶微球; S400、将所述三维水凝胶微球转移到Transwell培养皿嵌件的底部,形成一层稳定的神经侧基质, 将按照标准细胞培养规程得到的脑微血管内皮细胞悬液加入到Transwell培养皿的下室中,使得脑微血管内皮细胞附着在Transwell膜的下表面,并向水凝胶微球中生长,将整个Transwell培养皿置于37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养; 所述S100包括如下子步骤: S110、将明胶溶解在去离子水中,形成第一混合溶液,持续搅拌并缓慢加入甲基丙烯酸酐,制备得到第二混合溶液,将第二混合溶液至于45~55℃环境下反应3~4h,制备得到纯化GelMA溶液; S120、将RGD环肽、神经生长因子以及脑源性神经营养因子溶解在磷酸盐缓冲盐水中制备得到功能性生物活性肽溶液; S130、将纯化GelMA溶液和功能性生物活性肽溶液均匀混合,混合均匀后,加入光引发剂,制备得到光控生物功能化水凝胶; 所述功能性生物活性肽溶液与磷酸盐缓冲盐水的质量比为0.001:1; 所述功能性生物活性肽溶液中的RGD环肽、神经生长因子以及脑源性神经营养因子质量比为1000:0.1:0.1; 所述S200包括如下子步骤: S210、将冻存的星形胶质细胞和神经元细胞解冻,并离心去冻存保护剂; S220、将离心后的细胞重悬于新鲜培养基中,接种到细胞培养瓶,并将细胞培养瓶置于37℃、5%CO2的细胞培养箱中进行培养; S230、收集培养好的细胞用无血清培养基或水凝胶前驱体溶液重悬细胞,并调整细胞的浓度。
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