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龙图腾网获悉南京大学申请的专利一种基于环境DNA宏条形码技术的鱼类定量方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN116144785B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-11-04发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202211175107.0，技术领域涉及：C12Q1/6888；该发明授权一种基于环境DNA宏条形码技术的鱼类定量方法是由杨江华;钱林皓;张效伟设计研发完成，并于2022-09-26向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种基于环境DNA宏条形码技术的鱼类定量方法在说明书摘要公布了：本发明公开了一种基于环境DNA宏条形码技术的鱼类定量方法，属于鱼类多样性研究领域。该方法在现有技术基础上，在DNA提取步骤中加入转化了单拷贝质粒的大肠杆菌，通过单拷贝质粒的提取效率来校正DNA提取的误差，使获得的样品中DNA拷贝数更加准确；在PCR扩增步骤中加入梯度参照物，扩增后测序获得梯度参照物的reads数，拟合得到DNA拷贝数与reads数之间的线性斜率，结合测序获得的样品DNA的reads数，计算样品中DNA拷贝数。通过DNA提取、PCR扩增和测序的联合校正，弥补了现有方法中未考虑DNA提取过程和PCR过程误差的不足，可以使得测序数据更好地反映鱼类的绝对丰度，具有大规模推广应用的潜力。

本发明授权一种基于环境DNA宏条形码技术的鱼类定量方法在权利要求书中公布了：1.一种基于环境DNA宏条形码技术的鱼类定量方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤： 1提取样品DNA获得DNA提取物，在提取时加入已知拷贝数的参照物DNA，提取完成后检测DNA提取物中参照物DNA的拷贝数；所述加入已知拷贝数的参照物DNA是通过加入已知菌体浓度的大肠杆菌进行，所述大肠杆菌转化了包含目的基因片段A的单拷贝质粒，所述目的基因片段A包括可以进行qPCR的特异性片段；所述检测DNA提取物中参照物DNA的拷贝数包括通过检测提取后单拷贝质粒的拷贝数确定，单拷贝质粒的拷贝数通过qPCR技术检测单拷贝质粒中目的基因片段A的拷贝数确定； 2PCR扩增，以步骤1中的DNA提取物为模板，利用鱼类12S通用引物进行扩增；在步骤2中，PCR扩增过程中加入不同浓度的三种内标DNA片段混合物，所述三种内标DNA片段两端相同且均为鱼类通用引物设计区，不同在于三种内标DNA片段包括在上述鱼类通用引物设计区相同位置插入12～20bp的长短相同但序列不同的随机序列，上述位置位于PCR扩增中设计的鱼类12S通用引物序列之间； 3PCR扩增结果测序，对步骤2中PCR扩增结果进行纯化、建库、测序，获得原始reads数；测序后可以通过随机序列识别三种内标DNA片段，获得三种内标DNA片段reads数； 4联合运用DNA提取过程和PCR过程校正获得拷贝数 DNA提取效率校正，包括如下方法： a根据以下的公式计算样品的DNA提取效率： η＝D提取后÷D0 其中，η——某个样品的DNA提取效率；D提取后——提取完成后DNA提取物中参照物DNA的拷贝数，D0——DNA提取时加入样品中的参照物DNA的拷贝数； PCR扩增和测序过程校正，包括如下方法： a汇总各个样品在步骤2PCR扩增中加入的三种内标DNA片段的reads数，与它们初始添加的拷贝数进行线性拟合，得到拟合斜率slope； 联合运用DNA提取过程和PCR过程校正，包括如下方法： η＝D提取后÷D0 C＝R0÷slope×η 其中，C——某样品进行联合校正后的拷贝数；R0——该样品的原始reads数，slope——该样品中的标准质粒线性拟合得到的斜率；η——该样品的DNA提取效率；D提取后——提取完成后DNA提取物中参照物DNA的拷贝数，D0——DNA提取时加入样品中的参照物DNA的拷贝数。

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