湖南师范大学;湖南岳麓山水产育种科技有限公司刘少军获国家专利权
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龙图腾网获悉湖南师范大学;湖南岳麓山水产育种科技有限公司申请的专利小龙虾胚胎染色体的制备方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN116593245B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-11-04发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202310388834.3,技术领域涉及:G01N1/28;该发明授权小龙虾胚胎染色体的制备方法是由刘少军;王余德;刘武霞;覃钦博;罗凯坤;王冬武;田欣设计研发完成,并于2023-04-12向国家知识产权局提交的专利申请。
本小龙虾胚胎染色体的制备方法在说明书摘要公布了:本发明属于动物细胞学实验技术领域,具体公开了一种小龙虾胚胎染色体的制备方法,包括如下步骤:取无节幼体期的小龙虾胚胎,浸于秋水仙素溶液中,在恒温培养箱中培养,离心后弃上清,得到细胞团沉淀;再经过低渗、固定、制片、喷片、染色、镜检,即得到小龙虾胚胎染色体。本发明首次采用无节幼体期的小龙虾胚胎制备染色体,克服了取样数量的限制,同时不用解剖亲本虾,而且染色体分裂相干净,分裂相数目较多,染色体数目形态清晰,有利于染色体的组型和染色体的遗传分析;操作简单,制作周期短,成本低廉。最终,通过该方法能获得小龙虾清晰的体细胞染色体数为188条。
本发明授权小龙虾胚胎染色体的制备方法在权利要求书中公布了:1.一种小龙虾胚胎染色体的制备方法,其特征在于,包括如下步骤: 1前期处理:取无节幼体期的小龙虾胚胎,浸于浓度为500mgmL的秋水仙素溶液中,在温度为22-25℃的恒温培养箱中培养3-4h,1000-1100rmin离心5-10min后弃上清,得到细胞团沉淀; 2低渗:去净秋水仙素溶液,用0.75%KCl于37℃进行低渗处理20-30min,移去低渗液; 3固定:将步骤2后得到的细胞团进行预固定、后固定; 4制片:取步骤3后固定得到的胚胎于离心管中,并加入浓度为2mgmL的链酶蛋白酶进行消化20min,再加入体积浓度为50-60%的醋酸溶液进行软化15-20min,撕掉胚胎的受精膜,再捣碎使胚胎细胞解离分散,离心后倒去上层的液体,加入固定液后用吸管吹打均匀,得到细胞悬液;所述离心的转速为1000-1100rmin,时间为5-10min;所述固定液由甲醇和冰醋酸按体积比1∶1混合得到; 5喷片:将预冷的载玻片倾斜放置,用滴管吸取步骤4得到的所述细胞悬液,垂直喷到载玻片上,在酒精灯外焰上烘烤后,置于空气中干燥; 6染色:用吉姆萨染液对步骤5得到的附着有染色体的载玻片进行染色;所述吉姆萨染液的配置方法如下:称取0.5g的Giemsa颗粒放入研钵,加入少许的甘油,研碎Giemsa颗粒,再加入甘油使其总量为33mL,将其混匀得到混合液;将所述混合液于60℃水浴加热90min,加入33mL甲醇混匀,趁热过滤入棕色的玻璃瓶中,置于阴凉干燥处熟化至少半个月,用磷酸缓冲液按9∶1的体积比稀释后配制后使用; 7镜检:在显微镜下进行观察和拍照。
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