华南农业大学袁晓龙获国家专利权
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龙图腾网获悉华南农业大学申请的专利调控PAFAH1B1基因转录活性的方法及其应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119614569B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-11-04发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202411826932.1,技术领域涉及:C12N15/113;该发明授权调控PAFAH1B1基因转录活性的方法及其应用是由袁晓龙;张哲;何颖婷;李加琪;周尹祺;高亚辉;李念;李硕设计研发完成,并于2024-12-11向国家知识产权局提交的专利申请。
本调控PAFAH1B1基因转录活性的方法及其应用在说明书摘要公布了:本申请提供了一种调控PAFAH1B1基因转录活性的方法及其应用,属于基因表达调控技术领域。方法包括使用gRNA片段、DNA甲基转移酶抑制剂或DNA甲基转移酶的RNA干扰片段影响PAFAH1B1基因启动子区的甲基化水平。该方法应用于卵巢颗粒细胞中,在不同的处理下,能够对卵巢颗粒细胞中PAFAH1B1的mRNA水平和蛋白表达水平产生显著促进或抑制。本申请首次明确了DNA甲基化对卵巢颗粒细胞中PAFAH1B1基因转录活性能够产生明显影响,首次明确了DNA甲基化作用于PAFAH1B1基因启动子区的位置,揭示了DNA甲基化通过改变PAFAH1B1启动子区染色质结构,影响PAFAH1B1基因表达的机制,为调控颗粒细胞功能及卵巢发育提供一种更为简单、有效的新途径,并对后续哺乳动物卵巢颗粒细胞功能、卵泡发育及初情启动研究具有重要的应用价值。
本发明授权调控PAFAH1B1基因转录活性的方法及其应用在权利要求书中公布了:1.一种提高人卵巢颗粒细胞PAFAH1B1基因转录活性的方法,其特征在于,在体外环境下,使用dCas9-TET1系统降低人卵巢颗粒细胞中PAFAH1B1基因的甲基化水平,促进所述PAFAH1B1基因的表达; 降低所述PAFAH1B1基因的甲基化水平包括降低所述PAFAH1B1基因启动子区的甲基化水平,所述PAFAH1B1基因启动子区包括CpG岛,所述CpG岛位于所述PAFAH1B1基因-880bp~+170bp范围内; 所述CpG岛包括CGI1、CGI2、CGI3,所述CGI1位于所述PAFAH1B1基因-880bp~-592bp范围内,所述CGI2位于所述PAFAH1B1基因-506bp~-296bp范围内,所述CGI3位于所述PAFAH1B1基因-7bp~+170bp范围内; 针对所述CGI3区域设计对应的gRNA,分别是gRNA1、gRNA2,分别使用dCas9-TET1融合载体和gRNA1或dCas9-TET1融合载体和gRNA2处理细胞; 所述gRNA1的序列如SEQIDNO.18所示,所述gRNA2的序列如SEQIDNO.19所示。
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