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龙图腾网获悉合肥综合性国家科学中心大健康研究院;重庆嘉士腾医药有限公司申请的专利一种含间质的肝类器官的制备方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN119842594B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-11-04发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202411973036.8，技术领域涉及：C12N5/071；该发明授权一种含间质的肝类器官的制备方法是由徐晨珂;吴非凡;汪燕燕;何晓燕;黄璘设计研发完成，并于2024-12-30向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种含间质的肝类器官的制备方法在说明书摘要公布了：本发明公开了一种含间质的肝类器官诱导方法，属于类器官培养技术领域。该方法包括以下步骤：1人胚胎干细胞WIBR3预处理；2利用人胚胎干细胞WIBR3诱导肝类器官和间充质细胞；3将间充质细胞与肝类器官细胞共同培养，即得到含间质的肝类器官。有益效果：本发明改变了含间质的肝类器官的培养模式和方法。本发明提出的含间质的肝类器官诱导方法简单，间质细胞和其他肝细胞具有同一遗传背景来源，适用于药物等化学物质的安全性评估，肝纤维化，非酒精性肝炎建模及药效评估。

本发明授权一种含间质的肝类器官的制备方法在权利要求书中公布了：1.一种含间质的肝类器官的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： 1人胚胎干细胞WIBR3预处理： 先将WIBR3细胞培养至可传代时，用Accutase消化液消化；消化完成后，使用DMEMF12培养基终止消化，收集细胞悬液并进行离心，丢弃上清液，收集细胞沉淀； 再对收集的细胞沉淀使用干细胞培养基重悬后，铺于孔板中，添加凋亡抑制剂后混匀； 2利用人胚胎干细胞WIBR3诱导肝类器官和间充质细胞： 取一部分经过1处理的WIBR3细胞，使用肝类器官培养基进行培养，得到肝类器官细胞；再另取一部分经过1处理的WIBR3细胞，使用间质细胞诱导培养基进行诱导分化，得到间充质细胞； 使用肝类器官培养基进行培养的步骤包括： 培养1~2天后更换培养基，使用肝类器官培养基S1贴壁培养； 培养2~4天后更换培养基，使用肝类器官培养基S2贴壁培养； 培养5~7天后更换培养基，使用肝类器官培养基S3贴壁培养； 所述肝类器官培养基S1-S3包括基础培养基RPMI1640或Hepatocyte培养基，不含维生素A的B27，100~200ngmL的ActivinA，50~100ngmL的Wnt-3a，10~50ngmL的FGF2，20~50ngmL的BMP4，其中肝类器官培养基S1中使用100x的不含维生素A的B27，肝类器官培养基S2中使用50x的不含维生素A的B27； 所述间质细胞诱导培养基包括基础培养基高糖DMEM，15~20%KSR，200mMGlutamine,100x的NEAA，0.1~0.5μM的beta-巯基乙醇，100~300ngmL的FGF2，100~300ngmL的PDGF-BB； 3将间充质细胞与肝类器官细胞共同培养，即得到含间质的肝类器官； 间充质细胞与肝类器官细胞共同培养的步骤包括： 培养8-12天后更换培养基，使用肝类器官培养基S4贴壁培养； 培养4-6天后更换培养基，使用肝类器官培养基S5贴壁培养； 培养4-6天后更换培养基，使用肝类器官培养基S6贴壁培养； 培养4-6天后更换培养基，使用肝类器官培养基S7贴壁培养； 所述肝类器官培养基S4-S6包括Hepatocyte培养基或AdvancedDMEMF12，100x的不含维生素A的B27，100x的N2，5~10mM的HEPES，1.25~5mM的Nicotinamide，10~50μM的Gastrin； 所述肝类器官培养基S7包括Hepatocyte培养基，0.1~0.5%的BSA，100x的不含维生素A的B27，0.1~0.2mM的抗坏血酸，1.25~5mM的Nicotinamide，2~10μM的Y-27632，10~20ngmL的OSM，0.5~5μM的Dexamethasone。

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