国科大杭州高等研究院蔡车国获国家专利权
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龙图腾网获悉国科大杭州高等研究院申请的专利一种多能干细胞来源的人乳腺类器官及其构建方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN120041379B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-11-04发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202510518219.9,技术领域涉及:C12N5/071;该发明授权一种多能干细胞来源的人乳腺类器官及其构建方法是由蔡车国;张梦娜;赵家卉设计研发完成,并于2025-04-24向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种多能干细胞来源的人乳腺类器官及其构建方法在说明书摘要公布了:本发明的一种多能干细胞来源的人乳腺类器官及其构建方法,通过以下多阶段诱导培养获得:第一阶段培养:使用第一培养基培养1‑3天,获得表达表面外胚层标志物K8K18的表面外胚层阶段类器官;第二阶段培养:使用第二培养基培养1‑3天,获得具有明亮上皮并表达乳腺基板标志物EDAR和LEF1的乳腺基板样类器官;第三阶段培养:使用第三培养基培养3‑5天;第四阶段培养:使用第四培养基培养3‑5天;第五阶段培养:使用第五培养基培养8‑12天,形成具有基底细胞和管腔细胞的上皮结构,以及间充质细胞和血管内皮细胞模拟的乳腺生理微环境,并具有泌乳功能的成熟乳腺类器官。本发明成功构建了具有泌乳功能的成熟乳腺类器官。
本发明授权一种多能干细胞来源的人乳腺类器官及其构建方法在权利要求书中公布了:1.一种多能干细胞来源的人乳腺类器官,其特征在于,所述人乳腺类器官通过以下多阶段诱导培养获得: 第一阶段使用第一培养基定向诱导多能干细胞向表面外胚层谱系分化,所述第一培养基包括TGF-β超家族的生长因子和TGF-β信号调控因子,所述第一培养基包括MammoCultHumanMediumKit培养基、2%低生长因子基质胶、BMP4和SB431542,所述MammoCultHumanMediumKit培养基添加4μgmL肝素钠和0.48μgmL氢化可的松;第一培养基中BMP4的浓度为2.5-10.0ngmL,SB431542的浓度为4-12μM; 第一阶段使用第一培养基培养1-3天,获得表达表面外胚层标志物K8K18的表面外胚层阶段类器官; 第二阶段使用第二培养基驱动表面外胚层向乳腺基板分化,所述第二培养基包括Wnt信号调控因子,所述第二培养基包含MammoCultHumanMediumKit培养基和CHIR99021,所述MammoCultHumanMediumKit培养基添加4μgmL肝素钠和0.48μgmL氢化可的松,CHIR99021的浓度为8-12μM; 第二阶段使用第二培养基培养1-3天,获得具有明亮上皮并表达乳腺基板标志物EDAR和LEF1的乳腺基板样类器官; 第二阶段采用气液界面培养法,将第一阶段类器官用基质胶和胶原蛋白Ⅰ按1:1比例配制的混合凝胶重悬后,接种至预先包被相同混合凝胶的Transwell小室中,在下层加入培养基形成气液界面; 第三阶段使用第三培养基模拟胚胎期乳腺芽微环境,促使乳腺上皮祖细胞标记和间充质细胞产生,所述第三培养基包括TGF-β超家族的生长因子和旁分泌信号因子,所述第三培养基包含MammoCultHumanMediumKit培养基、BMP4和PTHrP,BMP4的浓度为37.5-75ngmL,PTHrP的浓度为100-200ngmL,第三阶段使用第三培养基培养3-5天,获得具有明亮上皮并表达乳腺基板标志物EDAR和LEF1的乳腺基板样类器官; 第四阶段使用第四培养基诱导乳腺上皮谱系分化,第四培养基包括Hedgehog信号调控因子,所述第四培养基包含EpiCult-BHumanMediumKit培养基和SANT-1,SANT-1的浓度为250nM,第四阶段使用第四培养基培养3-5天; 第五阶段使用第五培养基培养形成具有基底细胞和管腔细胞的上皮结构,以及间充质细胞和血管内皮细胞模拟的乳腺生理微环境,并具有泌乳功能的成熟乳腺类器官,所述第五培养基包括促进乳腺上皮形态发生的生长因子组合和代谢调控因子,所述第五培养基包含EpiCult-BHumanMediumKit培养基、FGF2、FGF10、HGF、EGF和Insulin。
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