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龙图腾网获悉湖南师范大学申请的专利一种快速生长红鲫纯合品系的构建方法和引物获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN120505373B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-11-04发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202510998835.9，技术领域涉及：C12N15/87；该发明授权一种快速生长红鲫纯合品系的构建方法和引物是由刘庆峰;刘少军;刘方磊;黄紫意;黄思杨;刘鸿文;舒玉琴;张纯设计研发完成，并于2025-07-21向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种快速生长红鲫纯合品系的构建方法和引物在说明书摘要公布了：本发明属于鱼类育种领域，公开了一种快速生长红鲫纯合品系的构建方法和引物，构建方法包括如下步骤：制备红鲫acvr2b基因的gRNA，将gRNA与Cas9蛋白的混合物显微注射到红鲫的一细胞期受精卵中，筛选获得F0代基因敲除突变体；将F0代基因敲除突变体自交，获得F1代突变体，筛选得到纯合突变体；纯合突变体自交扩繁，即得。本发明首次在红鲫中通过CRISPRCas9基因编辑技术成功建立了acvr2b纯合敲除品系，获得的acvr2b突变红鲫在12月龄较野生型体重提高30.68%，肌肉蛋白含量提高13.81%，肠道消化吸收能力明显提升，为鱼类遗传育种提供优质种质资源，具有良好的应用前景。

本发明授权一种快速生长红鲫纯合品系的构建方法和引物在权利要求书中公布了：1.一种快速生长红鲫纯合品系的构建方法，其特征在于，包括如下步骤： 1针对红鲫acvr2b基因外显子序列设计特异性靶点，基于该靶点合成相应的gRNA，将该gRNA与Cas9蛋白的混合物通过显微注射方式注射到红鲫的一细胞期受精卵中，经筛选得到F0代基因敲除突变体； 所述gRNA的制备过程包括：基于靶点序列设计特异性正向引物，以gRNA质粒为模板用所述特异性正向引物和通用反向引物进行PCR，纯化回收PCR产物获取gRNADNA模板，通过体外转录和纯化将gRNADNA模板制备成acvr2b基因的gRNA；红鲫acvr2b基因的gRNA的使用浓度为80ngμL，Cas9蛋白的使用浓度为100ngμL；每个受精卵的注射体积为3.0μL； 其中，所述靶点的核苷酸序列为： 5'-GGCTGCACTGTTACGCCTCC-3'； 所述特异性正向引物为： 5'-TGTAATACGACTCACTATAGGCTGCACTGTTACGCCTCCGTTTTAGAGCTAGAAATAGC-3'； 所述通用反向引物为： 5'-AGCACCGACTCGGTGCCACT-3'； 2将性成熟的F0代基因敲除突变体自交，获取F1代突变体，从中筛选获取纯合突变体； 3对纯合突变体进行自交，获取所述的快速生长红鲫纯合品系； 所述PCR的扩增反应体系及程序具体如下：5UµL高保真DNA聚合酶0.2µL，50mMMgSO42µL，10mMdNTPmix1μL，10×HighFidelityPCRBuffer5μL，gRNA质粒DR2742μL，特异性正向引物1μL，通用反向引物1μL，无核酸酶水补足至总体积50μL；扩增程序参数为：94℃预变性5min，94℃变性15s、66℃退火30s、68℃延伸20s、循环为30-35，68℃10min； 所述体外转录的体系如下：5×TranscriptAidReactionBuffer4.0μL，浓度为10mM的ATPTrisbuffered2μL，浓度为10mM的CTPTrisbuffered2μL，浓度为10mM的GTPTrisbuffered2μL，浓度为10mM的UTPTrisbuffered2μL，TranscriptAidEnzymeMix2.0μL，模板2μg，无核酸酶水补齐至20μL；充分混匀后，37℃温育3.0h，加入1μLTuRBoDNase，混匀，37℃温育20min，之后使用氯化锂沉淀法对其进行纯化。

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