暨南大学唐勇获国家专利权
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龙图腾网获悉暨南大学申请的专利一种表面增强拉曼效应与CRISPR/Cas12a联用的蛋白检测方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN115792239B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-11-14发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202210861181.1,技术领域涉及:G01N33/68;该发明授权一种表面增强拉曼效应与CRISPR/Cas12a联用的蛋白检测方法是由唐勇;梁家杰;滕佩君设计研发完成,并于2022-07-22向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种表面增强拉曼效应与CRISPR/Cas12a联用的蛋白检测方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种表面增强拉曼效应与CRISPRCas12a联用的蛋白检测方法,该方法包括以下步骤:将含有系列浓度标志蛋白的样品与适配体孵育,将所得产物与Cas12a蛋白、crRNA和拉曼探针孵育,孵育产物使用激光激发,检测其拉曼信号,识别4ATP的拉曼特征峰并分析其强度,得出标志蛋白浓度与4ATP的拉曼特征峰强度的标准曲线;将含有未知浓度标志蛋白的样品进行同样的分析,依据标准曲线计算样品中的标志蛋白浓度。与现有ELISA方法相比,本发明方法具有更高灵敏度,催化效率更高。
本发明授权一种表面增强拉曼效应与CRISPR/Cas12a联用的蛋白检测方法在权利要求书中公布了:1.一种非疾病诊断和治疗目的的表面增强拉曼效应与CRISPRCas12a联用的蛋白检测方法,其特征在于包括以下步骤: 1将含有系列浓度标志蛋白的样品与适配体在缓冲液中至少孵育30分钟,得到标志蛋白结合适配体的样品,将所得样品与Cas12a蛋白、crRNA和拉曼探针至少孵育20分钟,孵育产物使用激光激发,检测其拉曼信号,识别4-氨基苯硫酚的拉曼特征峰并分析其强度,得出标志蛋白浓度与4-氨基苯硫酚的拉曼特征峰强度的标准曲线; 2将含有未知浓度标志蛋白的样品按步骤1的操作进行分析,得出其4-氨基苯硫酚的拉曼特征峰强度,依据标准曲线计算样品中的标志蛋白浓度; 所述的适配体是一小段寡核苷酸序列,能够与标志蛋白特异性结合; 所述crRNA的序列与适配体互补; 所述的标志蛋白为前列腺特异抗原、SARS-CoV-2N蛋白、γ干扰素中的其中一种; 所述的标志蛋白为前列腺特异抗原时,适配体的核苷酸序列为:gggcggggcggacgagacagtaagggctgtgggtgtggtggaagaaact,配对的crRNA序列为:uaauuucuacuaaguguagauuuccaccacacccacagcccuuacuguc; 所述的标志蛋白为SARS-CoV-2N蛋白时,适配体的核苷酸序列为:gagaaggctggatgtcatccagccaacac,配对的crRNA序列为:uaauuucuacuaaguguagauguguuggcuggaugacaucc; 所述的标志蛋白为γ干扰素时,适配体的核苷酸序列为:ggggttggttgtgttgggtgttgtgt,配对的crRNA序列为:uaauuucuacuaaguguagauacacaacacccaacacaaccaacccc; 所述的拉曼探针由表面偶联4-氨基苯硫酚的银纳米颗粒和表面修饰链霉亲和素的磁珠构成,两部分之间用生物素修饰的单链DNA连接; 所述的单链DNA的核苷酸序列为: biotin-tttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttt-SH; 所述的缓冲液为含2mMMgCl2和0.02%Tween-20的PBS,pH值7.4; 步骤1所述激光的波长为785nm; 步骤1所述4-氨基苯硫酚的拉曼特征峰的波长为1074cm-1。
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