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龙图腾网获悉河南师范大学申请的专利鲤鱼抗鲤春病毒血症病毒口服疫苗及其制备方法和应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN116143940B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-11-14发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202210996525.X，技术领域涉及：C07K19/00；该发明授权鲤鱼抗鲤春病毒血症病毒口服疫苗及其制备方法和应用是由李趁;孔祥会;张云丽;裴超设计研发完成，并于2022-08-19向国家知识产权局提交的专利申请。

本鲤鱼抗鲤春病毒血症病毒口服疫苗及其制备方法和应用在说明书摘要公布了：本发明公开了一种鲤鱼抗鲤春病毒血症病毒口服疫苗及其制备方法和应用，其中口服疫苗由鲤春病毒血症病毒抗原蛋白与黄河鲤防御素蛋白通过柔性接头连接构建成融合蛋白并在大肠杆菌中表达，再通过生物载体富集而成，该融合蛋白编码基因序列包括鲤春病毒血症病毒抗原蛋白基因截短片段64‑1389bp和黄河鲤防御素蛋白去信号肽部分基因片段70‑201bp，以及连接两组基因片段的柔性接头融合基因。与已报道的抗SVCV疫苗相比，本发明制备的鲤鱼抗鲤春病毒血症病毒口服疫苗整个免疫过程不伤鱼体，操作简单、安全稳定，保护率更高。因此，这种口服疫苗为防控鲤春病毒血症提供了广阔的前景。

本发明授权鲤鱼抗鲤春病毒血症病毒口服疫苗及其制备方法和应用在权利要求书中公布了：1.鲤鱼抗鲤春病毒血症病毒口服疫苗，其特征在于：所述口服疫苗由鲤春病毒血症病毒抗原蛋白与黄河鲤防御素蛋白通过柔性接头连接构建成融合蛋白并在大肠杆菌中表达，再通过生物载体富集而成，该融合蛋白编码基因序列包括鲤春病毒血症病毒抗原蛋白基因截短片段64-1389bp和黄河鲤防御素蛋白去信号肽部分基因片段70-201bp，以及连接两组基因片段的柔性接头融合基因，其中鲤春病毒血症病毒抗原蛋白基因截短片段64-1389bp的C端与黄河鲤防御素蛋白去信号肽部分基因片段70-201bp的N端通过柔性接头融合基因连接形成融合蛋白编码基因； 其中鲤春病毒血症病毒抗原蛋白编码基因的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示； 黄河鲤防御素蛋白编码基因的核苷酸序列如SEQIDNO:2所示； 柔性接头融合基因的核苷酸序列如SEQIDNO:3所示； 所述鲤鱼抗鲤春病毒血症病毒口服疫苗的具体制备过程为； 步骤S1，分别扩增获得鲤春病毒血症病毒抗原蛋白编码基因序列和黄河鲤防御素蛋白编码基因序列，对鲤春病毒血症病毒抗原蛋白编码基因序列进行序列分析并去掉其N端信号肽，结合编码鲤春病毒血症病毒抗原蛋白对应的氨基酸疏水性和抗原决定簇，选取抗原性好且易于表达的氨基酸片段，对应的基因序列为鲤春病毒血症病毒抗原蛋白基因截短片段64-1389bp，对黄河鲤防御素蛋白编码基因序列进行序列分析并去掉其N端信号肽，选取其余的氨基酸序列，对应的基因序列为黄河鲤防御素蛋白去信号肽部分基因片段70-201bp； 步骤S2，将鲤春病毒血症病毒抗原蛋白基因截短片段64-1389bp和黄河鲤防御素蛋白去信号肽部分基因片段70-201bp通过柔性接头融合基因连接并插入pET-28a-GFP质粒的MCS区构建重组质粒； 步骤S3，将重组质粒转化至RosettaDE3感受态细胞，阳性克隆经菌液PCR筛选和测序验证后进行诱导表达：摇菌至OD600为0.5-0.6时加入不同浓度的IPTG，放入28℃过夜培养，取1mL菌液离心收集菌体，用PBS清洗后加入40μL蛋白裂解液，加入蛋白上样缓冲液煮沸变性，冷却后进行SDS-PAGE电泳分离，考马斯亮蓝染色并脱色后鉴定蛋白表达情况； 步骤S4，将各组诱导表达的菌液离心收集，并用PBS洗涤3次，最后用PBS配成相同浓度，在荧光显微镜下观察荧光蛋白表达情况，其余经福尔马林灭活，离心并用PBS洗涤3次去除福尔马林，保存备用； 步骤S5，将表达荧光的融合蛋白原核表达菌喂食轮虫，1h后于荧光显微镜下检测荧光强度，并拍照，根据荧光强度判断蛋白富集程度，随后用300目筛网收集轮虫，现用或者-80℃保存备用。

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