尼希尔株式会社禹东勋获国家专利权
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龙图腾网获悉尼希尔株式会社申请的专利人多能干细胞来源的心脏类器官的制备方法以及由其制备而得的人多能干细胞来源的心脏类器官获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN116249767B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-11-14发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202280006108.4,技术领域涉及:C12N5/077;该发明授权人多能干细胞来源的心脏类器官的制备方法以及由其制备而得的人多能干细胞来源的心脏类器官是由禹东勋;金慧智;金美珍;李寒星;林贞叔设计研发完成,并于2022-03-28向国家知识产权局提交的专利申请。
本人多能干细胞来源的心脏类器官的制备方法以及由其制备而得的人多能干细胞来源的心脏类器官在说明书摘要公布了:本发明涉及一种人多能干细胞来源的心脏类器官制备方法,其包括:A步骤:培养人多能干细胞hPSC,humanPluripotentStemCell,以制备直径为100μm至130μm的类胚体EmbryonicBody;B步骤:将上述通过A步骤制备而得的类胚体培养至直径达到200μm至250μm;C步骤:将上述通过B步骤制备而得的直径达到200μm至250μm的人多能干细胞来源的类胚体分化为含有中胚层细胞及内胚层细胞的构建体;D步骤:将上述通过C步骤分化而成的含有中胚层细胞及内胚层细胞的构建体分化为含有心肌细胞Cardiomyocyte、纤维母细胞Fibroblast及血管内皮细胞EndothelialCell的自组织心脏类器官;及,E步骤:将上述通过D步骤分化而成的自组织心脏类器官进行培养并使其成熟,其中,通过上述E步骤完成成熟化过程的心脏类器官,其心肌细胞Cardiomyocyte、纤维母细胞Fibroblast及血管内皮细胞EndothelialCell以55至65:15至30:15的细胞数比形成自组织。
本发明授权人多能干细胞来源的心脏类器官的制备方法以及由其制备而得的人多能干细胞来源的心脏类器官在权利要求书中公布了:1.一种人多能干细胞来源的心脏类器官的制备方法,其特征在于,包括: A步骤:培养人多能干细胞hPSC,humanPluripotentStemCell,以制备直径为100μm至130μm的类胚体EmbryonicBody; B步骤:培养将上述通过A步骤制备而得的类胚体,直至使其直径达到200μm至250μm; C步骤:将上述通过B步骤制备而得的直径达到200μm至250μm的人多能干细胞来源的类胚体分化为包含中胚层细胞及内胚层细胞的构建体; D步骤:将上述通过C步骤分化而成的包含中胚层细胞及内胚层细胞的构建体分化为包含有心肌细胞Cardiomyocyte、纤维母细胞Fibroblast及血管内皮细胞EndothelialCell的自组织心脏类器官;及 E步骤:将上述通过D步骤分化而成的自组织心脏类器官进行培养并使其成熟化; 其中,通过上述E步骤完成成熟化过程的心脏类器官的心肌细胞Cardiomyocyte、纤维母细胞Fibroblast及血管内皮细胞EndothelialCell以55至65:15至30:15的细胞数比形成自组织, 上述D步骤,包括: D-1步骤:将上述通过C步骤分化形成的包含中胚层细胞及内胚层细胞的构建体置于添加有B-27SupplementminusInsulin及浓度为40ngml至60ngml的L-抗坏血酸L-Ascorbicacid的RPMI1640培养基中,培养2天,以诱导心肌细胞Cardiomyocyte的分化; D-2步骤:在上述D-1步骤中使用的RPMI1640培养基中添加浓度为20ngml至40ngml的BMP4、浓度为20ngml至40ngml的VEGFVascularendothelialgrowthfactor、浓度为20ngml至40ngml的FGF2FibroblastGrowthFactor2后,将上述通过D-1步骤形成心肌细胞Cardiomyocyte分化诱导的构建体移入其中,培养2天,以诱导纤维母细胞Fibroblast及血管内皮细胞EndothelialCell的分化; D-3步骤:将上述通过D-2步骤形成心肌细胞Cardiomyocyte、纤维母细胞Fibroblast及血管内皮细胞EndothelialCell的分化诱导的构建体置于添加有B-27SupplementminusVitaminA、浓度为40μgml至60μgml的L-抗坏血酸L-Ascorbicacid、浓度为20ngml至40ngml的BMP4、浓度为20ngml至40ngml的VEGFVascularendothelialgrowthfactor及浓度为20ngml至40ngml的FGF2FibroblastGrowthFactor2的RPMI1640培养基中,培养2天;及 D-4步骤:将上述通过D-3步骤完成培养的构建体置于添加有B-27Supplement、浓度为20ngml至40ngml的BMP4、浓度为20ngml至40ngml的VEGFVascularendothelialgrowthfactor及浓度为20ngml至40ngml的FGF2FibroblastGrowthFactor2的RPMI1640培养基中,培养2天,以通过分化,来形成心脏类器官的自组织, 上述E步骤为:将上述通过D-4步骤分化并包含心肌细胞Cardiomyocyte、纤维母细胞Fibroblast及血管内皮细胞EndothelialCell的自组织心脏类器官置于添加有B-27Supplement、浓度为20ngml至40ngml的VEGFVascularendothelialgrowthfactor、浓度为20ngml至40ngml的FGF2FibroblastGrowthFactor2及作为抑制TGF-βTransformingGrowthFactor-β信号的成分的浓度为10ngml至15ngml的SB431542的RPMI1640培养基中,培养10天至20天,以使其成熟。
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