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龙图腾网获悉扬州大学申请的专利一种盐胁迫下延缓海滨雀稗叶片衰老的方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN117256458B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-11-14发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202311205797.4，技术领域涉及：C12Q1/6851；该发明授权一种盐胁迫下延缓海滨雀稗叶片衰老的方法是由潘玲;蔡丽蓉;许廷晨;王志勇;陆洋;王小山;严学兵;王琳;邬彩霞设计研发完成，并于2023-09-19向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种盐胁迫下延缓海滨雀稗叶片衰老的方法在说明书摘要公布了：本发明公开了一种盐胁迫下延缓海滨雀稗叶片延缓叶片衰老的方法；其操作步骤：植物材料培养和盐胁迫处理；H2O2含量测定；DAB染色；叶绿素含量和FvFm值测定；脂质组学数据测定和分析；内源激素水平分析；实时定量PCR技术分析基因表达水平；转录组学数据及分析。本发明发现盐驱动下海滨雀稗根源H2O2通过参与调控茉莉酸延缓叶片的衰老；其利用NADPH氧化酶抑制剂特异性抑制剂二苯硫碘DPI研究根源H2O2的作用；另外，从基因表达层面，探究根源H2O2存在与否对茉莉酸合成前体物质相关基因表达的影响；本发明中基于质谱技术的组学技术及数据分析是实施本项目的第一个关键技术；脂质组学，作为最重要的代谢组学分支之一，可在单个脂质种类水平进行定性和定量。

本发明授权一种盐胁迫下延缓海滨雀稗叶片衰老的方法在权利要求书中公布了：1.一种盐胁迫下延缓海滨雀稗叶片衰老的方法，其特征在于，其具体的操作步骤如下： 步骤1、植物材料培养和盐胁迫处理；具体是； 选取两个月大小和生长一致的海雀稗材料匍匐茎种植于底部有孔的育苗杯中；然后置于pH＝6.0的霍格兰溶液中水培，每7天更换一次溶液； 待海雀稗材料匍匐茎生长到第14天，放入植物培养箱进行盐处理； 后将盐处理后的海雀稗材料和对照处理的海雀稗材料分别在添加或不添加400mMNaCl的水培塑料容器中进行；NaCl浓度每天逐渐增加100mM，直到达到目标浓度400mM； 其中，在盐处理的第五天，分别从盐处理和对照处理的海雀稗材料中取样；为研究NADPH氧化酶介导根源H2O2的实验，在400mMNaCl溶液中添加100μM二苯基氯化碘； 处理5d后，收集根系用于后续分析； 每个处理设置6个生物学重复；使用3至6个生物重复进行实验； 所述植物培养箱的光照周期为：光照：16h，黑暗：8h； 温度为：白天：30℃，夜间：28℃； 相对湿度为：70％，光强为：1000lx； 步骤2、H2O2含量测定；具体是：采用H2O2测定试剂盒含量测定根源H2O2含量的变化； 步骤3、DAB染色；具体是：将分离的根系放入浓度为0.5mgml的DAB染液中，在室温下避光染色2h至6h；最后用纯水冲洗5次后，拍照并室温保存； 步骤4、叶绿素含量和FvFm值测定；具体是：总叶绿素含量测定采用分光光度法：用蒸馏水冲洗干净叶片后用滤纸吸干表面水分，称取剪碎的鲜叶片3份，每份2g，放入加有石英砂的研钵中研磨成浆，再加入乙醇10ml，研磨至组织变白； 在漏斗中过滤后，用乙醇将滤液定容100ml，分别在665nm、645nm和652nm下测定吸光度； 以95％乙醇为空白对照，则：Chla+b＝A62535.5×V÷1000×W； 步骤5、脂质组学数据测定和分析；具体是：取100mg叶片和根系样本，加入液氮并研磨成粉末提取脂质，使用NexeraUHPLCLC-30A系统和TripleTOF5600+质谱仪进行脂质的LC-MS分析； 柱温设置为40℃，流动相为0.1％HCOOH-H2OA-乙腈B，流速为0.3mLmin，梯度洗； 所述TripleTOF5600+质谱仪中ESI源条件设置如下：离子源Gas1：50，离子源Gas2：50，幕气：25，源温度：500℃450℃，离子萨帕里电压浮动5500V4400V， TOF-MS扫描范围：100-1200Da,TOFMS扫描积累时间0.2s，脱簇电位：±60V； LipidSearch软件用于脂质自动鉴定和相对定量分析； 步骤6、内源激素水平分析；具体是：将50mg新鲜根系冷冻在液氮中并放入2ml的塑料微管中进行样品的制备和提取； 采用基于ABSCIEXQTRAP6500LCMSMS系统进行植物激素含量的检测； 步骤7、实时定量PCR技术分析基因表达水平；具体是：利用实时定量PCR分析四个基因的相对表达量， 根据基因序列设计特异性引物：取2.5μL总RNA逆转录成cDNA，PCR通过ABI7500Real-TimePCRSystem和PremixEX-TaqTMII得以运行；PCR扩增采用20μL体积，每个PCR反应管内加入cDNA工作液2.5μL，PCR-mix10μL,5.5μL高压灭菌去离子水、上下游引物各1μL； PCR的反应条件设置为：95℃预变性30s，1个循环；95℃变性5s；60℃退火34s；72℃延伸45s，40个循环； 设置在延伸阶段收集荧光信号，反应结束后导出Ct值； 按照公式2-ΔΔCt计算相对表达量； α-actin基因作为内参基因，对处理和对照材料进行相对定量分析，每个样品设置3次重复； 步骤8、转录组学数据及分析；具体是：利用植物总RNA试剂盒提取叶片和根系的总RNA；转录组测序和从头组装cDNA文库的配对末端测序是使用HiSeq2000平台进行；对原始读数进行质量评估，然后使用Trimmomatic过滤接头序列和低质量碱基；Cleanreads使用HISAT2与参考基因组对齐； 通过计算每千碱基每百万映射读数的读数来标准化基因表达； 使用R软件的DESeq2包确定差异表达基因，并以错误发现率≤0.05和|log2FC|≥1作为阈值来确定基因表达的统计学显着差异；进行GO分析和KEGG代谢通路分析； RNA-seq读数存放在NCBI序列读取档案。

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