清源创新实验室范立海获国家专利权
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龙图腾网获悉清源创新实验室申请的专利一种借助翻译控制系统实现细胞工厂利用木糖和甲醇合成D-阿洛酮糖过程的自诱导解毒方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN118325983B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-11-14发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202410442079.7,技术领域涉及:C12P19/02;该发明授权一种借助翻译控制系统实现细胞工厂利用木糖和甲醇合成D-阿洛酮糖过程的自诱导解毒方法是由范立海;郭强;郑灵洁设计研发完成,并于2024-04-12向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种借助翻译控制系统实现细胞工厂利用木糖和甲醇合成D-阿洛酮糖过程的自诱导解毒方法在说明书摘要公布了:本发明涉及微生物代谢工程领域,提供一种借助翻译控制系统实现细胞工厂利用木糖和甲醇合成D‑阿洛酮糖过程的自诱导解毒方法,旨在实现D‑阿洛酮糖的绿色清洁生产。本发明借助木糖诱导型启动子Pxyl和组成型启动子Pdc分别控制翻译控制系统组件A01和S01的转录,实现细胞通过响应木糖自动调控甲醛解毒操作子FrmRAB的沉默和表达。在此基础上,将该系统转入利用木糖和甲醇合成D‑阿洛酮糖的重组菌株E.coliLMMasRNA100G,得到E.coliLMMGQ,摇瓶培养及实时荧光定量PCR实验证实了翻译控制系统能有效解决发酵后期的甲醇残留问题,为D‑阿洛酮糖绿色清洁生产提供优化方案。
本发明授权一种借助翻译控制系统实现细胞工厂利用木糖和甲醇合成D-阿洛酮糖过程的自诱导解毒方法在权利要求书中公布了:1.一种借助翻译控制系统实现细胞工厂利用木糖和甲醇合成D-阿洛酮糖过程的自诱导解毒方法,其特征在于,具体包括以下步骤: 1人工合成Pxyl,Pdc,A01和S01的基因序列,具体序列如SEQIDNO.1,SEQIDNO.2,SEQIDNO.3和SEQIDNO.4所示;使用两对引物Pxyl-FPxylA01-R和A01-FA01-R进行重叠PCR,得到融合基因片段Pxyl-A01;使用两对引物Pdc-FPdcS01f-R和frmRAB-FfrmRAB-R进行重叠PCR,得到融合基因片段Pdc-S01-SD-frmRAB;引物序列依次如SEQIDNO.5,SEQIDNO.6,SEQIDNO.7,SEQIDNO.8,SEQIDNO.9,SEQIDNO.10,SEQIDNO.11,SEQIDNO.12所示; 2利用酶切连接的方式,将所述Pxyl-A01和所述Pdc-S01-SD-frmRAB依次插入pACYCDuet*质粒的NdeI和KpnI,KpnI和AvrII之间,得到重组载体pACYC-ASF,完成翻译控制系统的构建; 所述pACYCDuet*质粒,是从pACYCDuet-1质粒演化而来,使用引物pACYC-F和pACYC-R,以pACYCDuet-1质粒为模板进行PCR,使用HindIII进行单酶切连接,得到不含T7启动子的pACYCDuet*质粒;引物序列如SEQIDNO.14和SEQIDNO.15所示; 3将pACYC-ASF转入重组菌株E.coliLMMasRNA100G,得到E.coliLMMGQ,使用培养基并添加50mM木糖进行摇瓶发酵;分别在24小时和72小时取样,进行实时荧光定量PCR检测,所述培养基含有30mgL氯霉素,100mgL氨苄霉素,100mM磷酸缓冲液和100mM甲醇,所述重组菌株E.coliLMMasRNA100G,来源于野生型大肠杆菌E.coliJM109DE3的人工改造,改造方式为敲除frmRAB、rpiA、pfkA、pfkB和galE基因,插入sumo、alsE和a6PP基因,并使用反义RNA抑制RPiB的表达。
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