成都汇欣华西慢性病医学研究院有限公司陆然获国家专利权
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龙图腾网获悉成都汇欣华西慢性病医学研究院有限公司申请的专利一种基于神经嵴类器官的间充质干细胞制备方法及应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119570722B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-11-14发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202411807798.0,技术领域涉及:C12N5/0775;该发明授权一种基于神经嵴类器官的间充质干细胞制备方法及应用是由陆然;莫显明;朱开友;张庆武设计研发完成,并于2024-12-10向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种基于神经嵴类器官的间充质干细胞制备方法及应用在说明书摘要公布了:本发明公开了一种基于神经嵴类器官的间充质干细胞制备方法及应用,包括以下步骤:步骤1:将人诱导多能干细胞加入消化液,消化后,加入培养基稀释;步骤2:收集细胞,将细胞离心分离,弃上清后悬浮于培养基中,调整细胞块大小,至50‑80微米大小;步骤3:将细胞进行培养,然后进行诱导分化神经嵴类器官;步骤4:将神经嵴类器官消化成单细胞后,转移至无血清间充质干细胞培养基中进行贴壁培养,然后进行扩增即可得到间充质干细胞;本发明利用诱导多能干细胞ihPSCs3D诱导分化得到神经嵴类器官,获取神经嵴类来源间充质干细胞,得到的NCC‑MSCs对胰腺炎具有改善与修复作用。
本发明授权一种基于神经嵴类器官的间充质干细胞制备方法及应用在权利要求书中公布了:1.一种基于神经嵴类器官的间充质干细胞的应用,其特征在于,所述间充质干细胞在制备治疗胰腺炎药物中的应用; 间充质干细胞的制备方法,包括以下步骤: 步骤1:将人诱导多能干细胞加入消化液,消化后,加入培养基稀释; 步骤2:收集细胞,将细胞离心分离,弃上清后悬浮于培养基中,调整细胞块大小,至50-80微米大小; 步骤3:将细胞团块进行拟胚体培养,然后进行神经嵴类器官的诱导分化;拟胚体形成第1天加入神经分化基础培养基,第2~7天替换为神经诱导基础培养基,第8~21天替换为神经分化基础培养基; 神经分化基础培养基包括:DMEMF12培养基47%vv、Gibco神经基质TM-A培养基47%vv、N-2添加剂0.94%vv、B-27添加剂1.9%vv、GlutaMAX添加剂0.94%vv、青链霉素混合液0.94%vv、MEM非必需氨基酸0.94%vv、2-巯基乙醇溶液0.094%vv、L-抗坏血酸溶液0.094%vv;2-巯基乙醇溶液的浓度为55mM,L-抗坏血酸溶液的浓度为200mM; 所述诱导分化第1天的神经分化基础培养基中含有:10μM的Y-27632、10μM的SB-431542、0.25μM的LDN193189、3μM的CHIR99021; 神经诱导基础培养基包括TGF-β受体激酶抑制剂、BMPI型受体抑制剂、GSK-3αβ抑制剂、CDK1cyclinB和GSK-3β抑制剂、FGF2生长因子、FGF8生长因子;其中各组分浓度分别为:TGF-β受体激酶抑制剂10μM、BMPI型受体抑制剂0.25μM、GSK-3αβ抑制剂3μM、CDK1cyclinB和GSK-3β抑制剂2.5μM、FGF2生长因子20ngml、FGF8生长因子25ngml; 诱导分化第8~14天的神经分化基础培养基包括视黄酸、分子化合物、平滑激动剂、生长分化因子11;其中各组分浓度分别为:视黄酸0.5μM、分子化合物0.5μM、平滑激动剂0.5μM、生长分化因子1120ngml;诱导分化第15~21天的神经分化基础培养基包括γ-分泌酶抑制剂DAPT、CultureOneTM添加剂、化合物E、脑源性神经营养因子、神经胶质细胞系衍生神经营养因子;其中各组分浓度分别为:γ-分泌酶抑制剂DAPT10μM、CultureOneTM添加剂1μM、化合物E0.1μM、脑源性神经营养因子20ngml、神经胶质细胞系衍生神经营养因子20ngml; 所述分子化合物为SHH激动剂PMF,平滑激动剂为SHH激动剂SAG; 步骤4:将神经嵴类器官进行消化分散成单细胞悬液后,转移至无血清间充质干细胞培养基中进行贴壁培养,然后进行扩增即可得到间充质干细胞;所述间充质干细胞中EPHA3、ADRA2A、PIK3R1、SOX2、C7、EIF1AY和APOE蛋白上调表达。
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