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龙图腾网获悉中国农业科学院植物保护研究所申请的专利一种兼抗烟粉虱和番茄黄曲叶病毒的RNAi重组载体及构建方法和应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN119662725B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-11-14发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202411916612.5，技术领域涉及：C12N15/84；该发明授权一种兼抗烟粉虱和番茄黄曲叶病毒的RNAi重组载体及构建方法和应用是由周雪平;杨秀玲;陈威;杜敏;李书鹏设计研发完成，并于2024-12-24向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种兼抗烟粉虱和番茄黄曲叶病毒的RNAi重组载体及构建方法和应用在说明书摘要公布了：本发明公开了一种兼抗烟粉虱和番茄黄曲叶病毒的RNAi重组载体及构建方法和应用，将在韧皮部表达的双生病毒伴随的DNAβ启动子构建到RNAi载体pCambia1391载体上，获得1391::DNAβpro载体骨架，用RT‑PCR的方法扩增烟粉虱关键基因BtACTB部分片段、TYLCV关键区段含病毒复制起始的基因间隔区、部分外壳蛋白和复制相关蛋白及其反向重复序列，构建一种由韧皮部启动子驱动，并同时靶向烟粉虱和番茄黄曲叶病毒关键序列的反向发夹结构的重组载体。并通过农杆菌转化的方法，将构建的重组载体导入番茄中，通过筛选得到了降低烟粉虱存活率及抑制TYLCV侵染的番茄植株。

本发明授权一种兼抗烟粉虱和番茄黄曲叶病毒的RNAi重组载体及构建方法和应用在权利要求书中公布了：1.一种兼抗烟粉虱和番茄黄曲叶病毒的RNAi重组载体的构建方法，其特征在于：由来自于在韧皮部特异表达的双生病毒的DNAβ启动子驱动，在多克隆位点处插入烟粉虱生长发育关键基因BtACTB和TYLCV的关键序列制备得到；其中，所述DNAβ启动子的序列如SEQIDNO:1所示，所述TYLCV和烟粉虱BtACTB的关键序列分别如SEQIDNO:2和SEQIDNO:3所示； 包括以下步骤： 1利用HindⅢ和EcoRⅠ双酶切RNAi载体pCambia1391，纯化回收DNA片段； 2利用引物对DNAβ-F和DNAβ-R，如SEQIDNO：4-5所示，以TYLCCNVbeta卫星侵染性克隆为模板，扩增DNAβ启动子，纯化回收DNA片段； DNAβ-F：GTTGGGCCCGGCGCGCCAAGCTTATACATATATATACGTATTCAAATA DNAβ-R：ATGGTGGACTCCTCTTAGAATTCGTTTATTTGTTGTGGATGATA 3通过同源重组的方法将DNAβ片段连接到线性化的pCambia1391载体上，获得重组质粒1391::DNAβpro； 4利用SmaI酶切目的载体1391::DNAβpro，纯化回收DNA片段； 5利用引物对BtACT-F和BtACT-R，如SEQIDNO：6-7所示，扩增烟粉虱BtACTB基因，利用引物对TYLCV-F和TYLCV-R，如SEQIDNO：8-9所示，扩增TYLCV的关键序列，纯化回收DNA片段； BtACT-F：ATGTGTGACGATGATGTAGCAGCCTT BtACT-R：CTCTCTTGGACTGGGCTTCGTCAC TYLCV-F：GAGCTCGACGACAAGACCCGGGGTTCCCTGCAGATTCTGATGAAT TYLCV-R：AATAATTATTTCCTTACCCCGGGGCCCTTACAACAGATATAAGA 6通过同源重组的方法将BtACTB和TYLCV的关键序列构建到线性化的1391::DNAβpro载体上，获得正向插入目的片段的重组质粒1391::DNAβpro-BtACT-TYLCV； 7利用MluI和SalI酶切目的载体1391::DNAβpro-BtACT-TYLCV，纯化回收DNA片段； 8利用引物对BtACTTYLCV-RNAi-F和BtACTTYLCV-RNAi-R，如SEQIDNO:10-11所示，扩增反向的融合BtACT和TYLCV的关键序列，纯化回收DNA片段； BtACTTYLCV-RNAi-F：GAGCTCGACGACAAGACCCGGGATGTGTGACGATGATGTAGCAGCCTT BtACTTYLCV-RNAi-R：ATAATTATTTCCTTACCCCGGGGCCCTTACAACAGATATAAGA 9通过同源重组的方法将反向的融合BtACT和TYLCV的关键序列构建到线性化的1391::DNAβpro-BtACT-TYLCV载体上，获得反向插入目的片段的重组质粒1391::DNAβpro-hpBtACT-TYLCV。

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