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龙图腾网获悉先思达(南京)生物科技有限公司;江苏先思达生物科技有限公司申请的专利一种基于胶内酶切和电泳技术的N-糖链检测方法和应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN120102665B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-11-14发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202510210169.8，技术领域涉及：G01N27/447；该发明授权一种基于胶内酶切和电泳技术的N-糖链检测方法和应用是由陈翠英;张超;李成;孟祥凤设计研发完成，并于2025-02-25向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种基于胶内酶切和电泳技术的N-糖链检测方法和应用在说明书摘要公布了：本发明公开了一种基于胶内酶切和电泳技术的N‑糖链检测方法和应用，该方法包括以下步骤：通过凝胶电泳分离糖蛋白样品并切割目标条带；对目标糖蛋白胶粒进行脱色和脱水处理；加入酶液在凝胶内直接酶解释放N‑糖链；超声处理后转移酶切液，干燥并标记N‑糖链样品；最后利用毛细管电泳进行分离、检测和分析。本发明创新性地将胶内酶切与毛细管电泳技术结合，避免了传统方法中复杂的样品转移和预处理步骤，显著简化了操作流程，减少了样品损失，特别适用于低丰度N‑糖链的高效检测。该方法具有高灵敏度、高分辨率和高通量的特点，可精确分析复杂生物样品中的N‑糖链，在疾病标志物筛查、临床诊断及糖组学研究中具有广泛应用。

本发明授权一种基于胶内酶切和电泳技术的N-糖链检测方法和应用在权利要求书中公布了：1.一种基于胶内酶切和电泳技术的N-糖链检测方法，其特征在于，包括以下步骤： 步骤1通过凝胶电泳技术对糖蛋白样品进行分离，制备凝胶； 步骤2在步骤1制备的凝胶上对目标糖蛋白条带进行切割，以获取目标糖蛋白胶粒； 步骤3将步骤2获取的目标糖蛋白胶粒放置于EP管中，加入脱色液对目标糖蛋白胶粒进行脱色，重复脱色1~3次，直至蓝色褪尽； 步骤4将EP管中的脱色液完全弃去后，向EP管中加入100%乙腈溶液，对目标糖蛋白胶粒进行脱水处理； 步骤5将EP管中的100%乙腈溶液完全弃去后，将100~300µL酶液加入含有目标糖蛋白胶粒的EP管中，37℃孵育30~60min以释放N-糖链，若此时胶粒无法完全浸没，则补25mMNH4HCO3溶液使胶粒完全浸没，37℃孵育过夜； 所述酶液的配方如下：将PNGaseF酶和唾液酸酶溶于25mMNH4HCO3溶液，所述PNGaseF酶的终浓度为1000~1500UmL，所述唾液酸酶的终浓度为100~150UmL； 步骤6将经步骤5处理的EP管放置超声清洗仪中，超声处理30~60min，漩涡振荡10~30s后，离心10~30s，重复该操作两次；将经超声处理的EP管中的液体全部转移至新的EP管中，离心10~30s，80℃开盖干燥1~2h，直至完全干燥，随后冷却到4℃；接着向干燥后EP管中加入10~20µL纯化水，反复吹打内壁四周，吹打完全后，涡旋1~2min，离心10~30s，80℃开盖干燥30~60min，直至完全干燥，随后冷却到4℃；继续向干燥后EP管中加入2~5µL荧光标记液，盖帽，编号，离心10~30s，90℃放置1~2h，冷却到4℃后，加入10~30µL终止液，漩涡振荡10~30s充分混匀，离心10~30s，制得N-糖链样品； 步骤7将步骤6制备的N-糖链样品在毛细管电泳仪上进行分离、检测和分析。

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