北京化工大学许海军获国家专利权
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龙图腾网获悉北京化工大学申请的专利氢化酶的表达载体组合、重组菌、酶组合物及其应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN116004683B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-11-18发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202210866080.3,技术领域涉及:C12N15/70;该发明授权氢化酶的表达载体组合、重组菌、酶组合物及其应用是由许海军;刘珞;王青云;邱增辉设计研发完成,并于2022-07-22向国家知识产权局提交的专利申请。
本氢化酶的表达载体组合、重组菌、酶组合物及其应用在说明书摘要公布了:本发明提供了氢化酶的表达载体组合、重组菌、酶组合物及其应用,属于基因工程与酶工程技术领域。本发明通过甲酸脱氢酶、甲醛脱氢酶、甲醛酶和甘油脱氢酶的联合使用,将一碳化合物还原为增值化学品甘油,通过生物酶氢化酶SH法实现能量辅因子NADH的快速再生和高效供给,为级联催化反应提供还原当量。在酶级联催化过程中,甲酸及甲醇对酶都有较强的抑制性,利用甲醛酶催化甲醛的缩合,可以得到中性二羟基丙酮,且反应不可逆,有效拉动了CO2的固定。该方法指导高效二氧化碳多酶固定化系统构建,为实现二氧化碳固定及生物能源的合成提供新方法和新思路。
本发明授权氢化酶的表达载体组合、重组菌、酶组合物及其应用在权利要求书中公布了:1.一种利用一碳化合物合成甘油的方法,包括以下步骤: 将一碳化合物、MgSO4、TPP、NAD+、FateDH、FaldDH、GLDH、FLS-M3和SH氢化酶混合,进行酶级联催化反应,得到甘油; 所述酶级联催化反应的反应体系以浓度为100mM的磷酸钠缓冲液作为反应体系缓冲液,所述反应体系含有以下浓度的组分:1~5mMMgSO4、0.1~1mMTPP、0.6~1.2mMNAD+、0.25~1UmlFateDH、0.1~0.5UmlFaldDH、0.05~0.5mgmlGLDH、0.05~0.5mgml的FLS-M3和0.2~0.8mgml的SH氢化酶;所述磷酸钠缓冲液的pH为7.5~8.0; 所述酶级联催化反应的反应温度为25℃,反应过程中通入H2,通入H2的流速为20~200mlmin,反应时间为1~12h; 所述一碳化合物为CO2、NaHCO3或KHCO3; 所述SH氢化酶的制备方法包括以下步骤: 将重组菌接种于M9优化培养基,进行诱导表达,得到诱导表达的菌液; 对所述菌液进行裂解,得到裂解液,所述裂解液中含有氢化酶; 所述M9优化培养基以M9培养基为基础培养基,还包括以下浓度的组分:50mgL卡那霉素、50mgL壮观霉素、质量体积分数为0.5%~2%的葡萄糖、体积分数为0.5%~6%的甘油、质量体积分数为0.5%~6%的乳糖、1~200μMNiCl2、1~200μM柠檬酸铁铵、1~200μM核黄素和体积分数为1%~10%的LB培养基; 所述重组菌含有氢化酶的表达载体组合;所述氢化酶的表达载体组合,包括第一表达载体和第二表达载体;所述第一表达载体以pM1作为骨架质粒,插入有hoxW基因表达盒、hoxN1基因表达盒和hypA2B2C1D1E1F2X基因表达盒;所述第二表达载体以pSH6作为骨架质粒,插入有hoxFUYHI2基因表达盒。
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